Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Placera en transgen mask som uttrycker GCaMP - ett kalciumavkänningsprotein - i en bildkammare tillsammans med bakteriemat för masken.
Transgena maskar uttrycker ett GCaMP-sensorprotein under kontroll av en promotor som driver GCaMP-uttryck i en specifik neuron. När den neuron aktiveras avfyrar den en åtgärdspotential, som depolariserar plasmamembranet.
GCaMP i den upphetsade neuron binder kalciumjonerna. Detta gör att GCaMP fluorescerar när maskarna avbildas med ett lågintensivt fluorescens excitationsljus.
- Kalciumavbildning utförs på ett sammansatt mikroskop som är utrustat för bred fältepfluorescens.
Kör en burst-film i 24 timmar som avbildar varje mask var 15:e till 30:e minut.
För visuell datainspektion, använd en falsk färgkarta för att förbättra synligheten för små förändringar i fluorescensintensiteten.
