Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- GCaMP'yi ifade eden bir transgenik solucanı -- kalsiyum algılayan bir proteini -- solucan için bakteriyel yiyeceklerle birlikte bir görüntüleme odasına yerleştirin. Sonra buharlaşmayı önlemek için kabı kapak ve laboratuvar filmi ile kapatın. Geniş alan epifluoresansı için donatılmış bileşik bir mikroskop altında görüntüleyin.
Transgenik solucanlar, belirli bir nöronda GCaMP ekspresyonunu yönlendiren bir promotörün kontrolü altındaki bir GCaMP sensör proteinini ifade eder.
Heyecanlı nörondaki GCaMP kalsiyum iyonlarını bağlar. Bu, solucanlar düşük yoğunluklu bir floresan heyecan ışığı ile görüntülendiğinde GCaMP'nin floresan olmasına neden olur. Örnek protokolde, agarose mikro şarampollerdeki transgenik C. eleganlarda AVA internöron aktivitesini görselleştirmek için kalsiyum görüntüleme kullanacağız.
- Kalsiyum görüntüleme, geniş alan epifluoresansı için donatılmış bileşik bir mikroskopta gerçekleştirilir. Işığa maruz kalmayı sınırlamak için, kamera bir çerçeveyi kaydederken numuneyi aydınlatmak için bir LED'i tetikleyen bir transistör-transistör mantık sinyali kullanın.
Her solucanı her 15 ila 30 dakikada bir görüntüleyen 24 saat boyunca bir seri film çalıştırın.
Görsel veri incelemesi için, floresan yoğunluğundaki küçük değişikliklerin görünürlüğünü artırmak için yanlış bir renk haritası kullanın.
