Medidas da área muscular de C. elegans: um método padronizado para quantificar a morfologia muscular estriada

- C. elegans têm dois tipos de músculos. Os músculos únicos sarcomere ou não-estriados incluem aqueles na faringe e vulva. Os múltiplos músculos sarcomere ou obliquamente estriados são músculos da parede corporal em forma de romóide nomeados para o padrão estriado regular de suas fibras de miosina.

Eles são organizados em pares escalonados como quatro feixes orientados longitudinalmente nos quatro quadrantes do corpo do verme vistos em seção transversal. Cada célula tem muitos pontos igualmente espaçados de apego à hipoderme e cutícula.

Para visualizar esses músculos, imagem imobilizou vermes com miose transgenicamente rotulada por microscopia confocal fluorescente. Use software de análise para medir a área de uma célula muscular e quaisquer lacunas no padrão de fibras dessa célula. Lacunas na organização de fibras musculares podem indicar interrupção por degradação de fibras ou o acúmulo de detritos celulares. Calcule a razão da área de gap para a área total para definir a quantidade de interrupção. No protocolo de exemplo, avaliaremos quantitativamente a morfologia muscular da parede corporal usando Fiji.

- Para medir a área da célula muscular, abra a imagem no software Fiji e use a Seleção do Polígono para rastrear cuidadosamente em torno de uma única célula muscular oblíqua. Ajuste a linha do polígono no final arrastando o ponto de âncora para melhorar o rastreamento. Navegue até a guia Analisar na parte superior do software e clique em Medir para calcular a área selecionada.

Para células musculares com região degenerada ou ausente, rastreie a área ausente com a ferramenta de seleção do polígono e clique em Medir novamente. Se houver múltiplas lacunas, rastreie cada uma separadamente. Calcule a razão da área de lacuna para a área de toda a célula. Uma alta razão indica uma maior extensão da degeneração muscular, e se não houver regiões ausentes, a razão é calculada como zero.