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Encyclopedia of Experiments: Biology

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C. elegans Muscle Area Measurements
 
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C. elegans Muscle Area Measurements: Un metodo standardizzato per quantificare la morfologia muscolare striata

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- C. gli elegani hanno due tipi di muscoli. I singoli muscoli sarcomei o non striati includono quelli della faringe e della vulva. I muscoli più sarcomei o striati obliquamente sono muscoli delle pareti del corpo a forma di romboide che prendono il nome dal modello striato regolare delle loro fibre di miosina.

Sono disposti in coppie sfalsate come quattro fasci orientati longitudinalmente nei quattro quadranti del corpo del verme visti nella sezione trasversale. Ogni cellula ha molti punti di attacco ugualmente distanziati all'ipoderma e alla cuticola. Questa disposizione aiuta a tradurre le ondate di contrazioni muscolari in locomozione liscia.

Per visualizzare questi muscoli, immagini worm immobilizzati con GFP transgenicamente etichettato miosina mediante microscopia confocale fluorescente. Utilizzare un software di analisi per misurare l'area di una cellula muscolare striata e gli eventuali spazi vuoti nel modello di fibra di tale cellula. Le lacune nell'organizzazione delle fibre muscolari potrebbero indicare interruzioni per la degradazione delle fibre o l'accumulo di detriti cellulari. Calcolare il rapporto tra l'area dello spazio e l'area totale per definire la quantità di interruzione. Nel protocollo di esempio, valuteremo quantitativamente la morfologia muscolare delle pareti del corpo utilizzando Fiji.

- Per misurare l'area delle cellule muscolari, aprire limmagine nel software Fiji e utilizzare Selezione poligono per tracciare attentamente intorno a una singola cellula muscolare obliqua. Regolare la linea del poligono alla fine trascinando il punto di ancoraggio per migliorare la traccia. Passare alla scheda Analizza nella parte superiore del software e fare clic su Misura per calcolare l'area selezionata.

Per le cellule muscolari con una regione degenerata o mancante, tracciate l'area mancante con lo strumento di selezione poligonale e fate di nuovo clic su Misura(Measure). Se sono disponibili più spazi vuoti, tracciateli separatamente. Calcolate il rapporto tra l'area dello spazio e l'area dell'intera cellula. Un rapporto elevato indica un'estensione maggiore della degenerazione muscolare e, se non vi sono regioni mancanti, il rapporto viene calcolato come zero.

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