Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans משמש כמודל ניסיוני של זיהום על ידי פתוגנים מעיים הגורמים למחלות, בין השאר, על ידי שיבוש מחסום המעי, הגדלת החדירות שלו.
לאחר מכן, מניחים את התולעים האלה על צלחות אגר עם מזון שכותרתו מורכב חום נהרג E. coli מעורבב עם FITC-dextran, פוליסכריד משקל מולקולרי גבוה עם תג פלואורסצנטי.
אפשר לתולעים לאכול את החיידקים המסומנים. אלה עם מחסומי מעיים שלמים ינקו במהירות את המזון, ואילו בתולעים עם מעיים חדירים יותר, סמן הפלואורסצנט יחדור מעבר ללומן של האיבר.
להעביר תולעים לפתרון פורמלדהיד כדי לתקן את בעלי החיים. לאחר 1 עד 2 דקות, להחליף את פורמלדהיד עם התקשורת הרכבה.
לבסוף, דמיינו את התולעים על ידי מיקרוסקופיה פלואורסצנטית.
בפרוטוקול הדוגמה, אנו נסיר את ההשפעה של טיפול עם דים biomolecule על חדירות המעי של תולעים נגועים פתוגניים Pseudomonas aeruginosa חיידקים.
- הכן את הלוחות בתוספת FITC-dextran על ידי ערבוב 2 מיליליטר של חום מומת E. coli עם 4 מיליגרם של FITC-dextran. מוסיפים 100 מיקרוליטרים של התערובת לכל אחד מ-20 צלחות אגר NGM טריות ומאפשרים לצלחות להתייבש במשך שעה על ספסל מעבדה נקי. לאחר 48 שעות של טיפול, שטפו את התולעים עם S Buffer. העבירו אותן ללוחות בתוספת FITC-dextran ולצלחות NGM ללא FITC-dextran והדגירה של הצלחות בן לילה.
למחרת, לשטוף את התולעים עם S Buffer ולאפשר להם לזחול בצלחת NGM אגר טרי במשך שעה אחת.
- פורמלדהיד הוא כימיקל רעיל ויש לטפל בו בזהירות.
