Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 주사를 준비하기 위해 벌레 를 사용하여 아가로즈 패드에 할로카본 오일의 트랙을 놓습니다.
큐티클을 통해 바늘을 부드럽게 밀어 핵산 또는 관심 화합물로 고나드 팔을 주입합니다. 각 고나드 팔에는 개별 난소세포로 발전할 생식선 싱크로티늄이 들어 있습니다.
벌레를 주입한 후, 오일을 M9 버퍼로 교체하십시오. 웜이 움직이기 시작하면, 세균성 식품으로 NGM 한천판으로 이송한다.
- 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 C. elegans 및 아가로즈 패드의 준비로 시작합니다. 웜 픽을 사용하여 패드의 한쪽 가장자리를 따라 할로카본 오일의 작은 트랙을 놓습니다. 한 번에 하나의 웜을 마운트하고 주입합니다.
일단 위치에 패드에 부착되면, 벌레 선택의 끝에서 할로카본 오일의 또 다른 몇 방울으로 벌레를 오버레이. 장착 된 벌레와 커버 슬립을 주입 현미경에 배치. 낮은 배율하에서, 벌레를 주입 바늘에 수직으로 배치, 이는 RNP 용액으로 채워졌다, 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이.
높은 배율로 전환하고 고나드 암에 인접한 바늘을 재배치, 중간-후기-파시텐의 핵 부근 부위에 대응. 마이크로 조작기를 사용하여, 벌레에 바늘을 움직여 큐티클을 약간 우울하게 한다. 한 손으로는 현미경 단계의 측면을 탭하여 큐티클을 통해 바늘을 충격.
웜을 주입하면 아가로즈 패드의 커버슬립을 제거하고 해부 현미경 아래에 놓습니다. 이 치료를 수행하여 한천에서 벌레를 풀어 놓습니다. 10분 후, 벌레가 완충제에서 주위를 맴돌때, 당겨진 모세관 파이펫을 사용하여 OP50 박테리아가 있는 NG 한천 판으로 이동합니다. OP50이 있는 한천 플레이트는 플레이트를 섭씨 25도로 옮길 수 있습니다.
