Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- للتحضير للحقن، استخدام اختيار دودة لوضع مسار من زيت الهالوكربون على لوحة agarose. ضع الديدان في الزيت وشل حركتها عن طريق دفعها بلطف على لوحة أجار. تأكد من أن الزيت يغطي الحيوانات بالكامل.
ادفع الإبرة بلطف عبر الجلد وحقن ذراع الوند بالحمض النووي أو مركب الفائدة.
بعد حقن الديدان ، استبدل الزيت بحاجز M9. بمجرد أن تبدأ الديدان في التحرك ، قم بنقلها إلى لوحة NGM agar مع الطعام البكتيري.
- تبدأ مع إعداد C. elegans ومنصات agarose كما هو موضح في بروتوكول النص. استخدام اختيار دودة لوضع مسار صغير من زيت الهالوكربون على طول حافة واحدة من لوحة. ثم، استخدم اختيار دودة المغلفة في النفط لرفع العديد من الديدان قبالة لوحة أجار NG وإلى مسار النفط. جبل وحقن دودة واحدة في وقت واحد.
مرة واحدة في الموقف وتعلق على لوحة، تراكب الديدان مع بضع قطرات أخرى من زيت الهالوكربون من غيض من اختيار دودة. ضع زلة الغطاء مع الديدان المركبة على المجهر الحقن.
التحول إلى التكبير عالية وإعادة وضع الإبرة المجاورة للذراع الغند، المقابلة للمنطقة بالقرب من النوى في منتصف إلى أواخر pachytene. باستخدام micromanipulator، تحريك الإبرة ضد الدودة، والاكتئاب لطيف قليلا. ثم، بيد واحدة، اضغط على جانب مرحلة المجهر لهز الإبرة من خلال لطيف. الاكتئاب دواسة الحقن أو زر، وملء ببطء إلى ذراع النخر مع مزيج الحقن، وإزالة الإبرة.
بمجرد حقن الديدان ، قم بإزالة الغطاء في لوحة الآغروز ووضعه تحت مجهر تشريح. إجراء هذا العلاج للافراج عن الديدان من أجار. بعد 10 دقائق، عندما الديدان تسحق حولها في المخزن المؤقت، ونقلها إلى لوحة أجار NG مع البكتيريا OP50 باستخدام ماصة الشعرية سحبت. لوحات أجار مع OP50 ثم، نقل لوحات إلى حاضنة 25 درجة مئوية.
