गोनाड माइक्रोइंजेक्शन: सी एलिगेंस के जर्मलाइन में सीधे यौगिक वितरण की एक विधि

- इंजेक्शन के लिए तैयार करने के लिए, एक एग्राजिंग पैड पर हेलोकार्बन तेल का ट्रैक बिछाने के लिए एक कीड़ा लेने का उपयोग करें। कीड़े को तेल में रखें और उन्हें धीरे-धीरे आगर पैड पर धकेलकर स्थिर करें. सुनिश्चित करें कि तेल जानवरों को पूरी तरह से कवर करता है। यह ऑक्सीजन को उत्तेजना को रोकते समय कीड़े तक ले जाने की अनुमति देता है। इसके बाद, एग्राजिंग पैड को इंजेक्शन माइक्रोस्कोप पर रखें और सुई के लंबवत को कीड़े में रखें, एक गोनाड आर्म के डिस्ट्रल एंड को निशाना बनाते हुए।  

धीरे-धीरे सुई को क्यूटिकल के माध्यम से पुश करें और गोनेड आर्म को न्यूक्लिक एसिड या ब्याज के यौगिक के साथ इंजेक्ट करें। प्रत्येक गोंड़ हाथ में एक जर्मलाइन सिंकायियम होता है जो व्यक्तिगत ओसाइट्स में विकसित होगा। डिस्टल गोंड में इंजेक्ट की गई सामग्री को उन ओसाइट्स में शामिल किया जाएगा और अगली पीढ़ी को प्रभावित करेगा।

कीड़े लगाने के बाद तेल को M9 बफर से बदल दें। - एक बार कीड़े हिलने लगें तो उन्हें बैक्टीरियल फूड के साथ एनजीएम एगर प्लेट में ट्रांसफर कर दें। - निम्नलिखित प्रोटोकॉल में गोनेड माइक्रोइंजेक्शन विधि का इस्तेमाल कैप 9 कॉम्प्लेक्स को टारगेट करने और एडिट करने के लिए किया जाता है।

- पाठ प्रोटोकॉल में वर्णित सी एलिगेंस और एगरल्ड पैड की तैयारी के साथ शुरू करें। एक एगरेज़ इंजेक्शन पैड और कवर स्लिप को विच्छेदन दायरे पर रखें। पैड के एक किनारे के साथ हेलोकार्बन तेल का एक छोटा ट्रैक बिछाने के लिए एक कीड़ा लेने का उपयोग करें। फिर, तेल में लेपित कीड़ा का उपयोग एनजी आगर प्लेट से कई कीड़े उठाने के लिए और तेल के ट्रैक में । एक पिपेट से जुड़े ठीक बालों के साथ, जैसे कि एक बरौनी या बिल्ली मूंछ, समानांतर में कीड़े को धीरे से एगरल्ड पैड में धकेलने की स्थिति । जब तक माइक्रोइंजेक्शन प्रक्रिया के साथ आरामदायक, केवल माउंट और एक समय में एक कीड़ा सुई।

एक बार स्थिति में और पैड से जुड़ा हुआ, कीड़े लेने की नोक से हेलोकार्बन तेल की एक और कुछ बूंदों के साथ कीड़े ओवरले । कवर स्लिप को इंजेक्शन माइक्रोस्कोप पर घुड़सवार कीड़े के साथ रखें । कम आवर्धन के तहत, कीड़े को इंजेक्शन सुई के लंबवत स्थिति में रखें, जैसा कि पाठ प्रोटोकॉल में वर्णित है ।

एक उच्च आवर्धन पर स्विच करें और गोनाड बांह से सटे सुई को फिर से स्थान दें, मध्य में नाभिक के पास के क्षेत्र के अनुरूप देर से पचयितीन। माइक्रोमैनीपुलेटर का उपयोग करके, कीड़े के खिलाफ सुई को स्थानांतरित करें, क्यूटिकल को थोड़ा निराशाजनक करें। फिर, एक हाथ से, माइक्रोस्कोप चरण के किनारे टैप करके क्यूटिकल के माध्यम से सुई को झटका दें। इंजेक्शन पेडल या बटन को दबाना, धीरे-धीरे इंजेक्शन मिश्रण के साथ गोनाड आर्म को भरें, और सुई को हटा दें।

एक बार कीड़े इंजेक्ट हो जाने के बाद, एगरेग्मेंट पैड में कवरस्लिप को हटा दें और इसे विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे रखें। एक खींचे गए केशिका पिपेट का उपयोग करके, उनके ऊपर एम9 बफर को पाइप करके कीड़े से तेल को विस्थापित करें। आगर से कीड़े छुड़ाने के लिए यह ट्रीटमेंट करें। 10 मिनट के बाद जब कीड़े बफर में चारों ओर से पिटाई कर रहे हों तो उन्हें खींचे गए केशिका पिपेट का इस्तेमाल करते हुए OP50 बैक्टीरिया के साथ एनजी एगर प्लेट में ले जाएं । प्लेट को दो से तीन घंटे के लिए 20 डिग्री सेल्सियस पर रखें जब तक कीड़े बरामद न हो जाएं और इधर-उधर घूम रहे हों । एक बार बरामद होने के बाद, व्यक्तिगत रूप से कीड़े को एनजी में स्थानांतरित करें । OP50 के साथ आगर प्लेटें फिर, प्लेटों को 25 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में स्थानांतरित करें।