Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- För att förbereda injektionen, använd ett maskplock för att lägga ett spår av halokarbonolja på en agarose pad. Placera maskar i oljan och immobilisera dem genom att försiktigt trycka dem på agarplattan.
Tryck försiktigt nålen genom nagelbandet och injicera gonadarmen med nukleinsyran eller föreningen av intresse. Varje gonadarm innehåller en bakteriesynkytium som kommer att utvecklas till enskilda äggceller. Material injicerat i den distala gonad kommer att införlivas i dessa äggceller och påverka nästa generation.
Efter att ha injicerat maskar, ersätt oljan med M9-buffert. När maskarna börjar röra sig, överför dem till en NGM-agarplatta med bakteriemat.
- Börja med beredning av C. elegans och agarose pads enligt beskrivningen i textprotokollet. Använd sedan maskplockningen belagd med olja för att lyfta flera maskar från NG-agarplattan och in i oljespåret. montera och injicera en mask i taget.
När maskarna är på plats och fästas på dynan, överlägg maskarna med ytterligare några droppar halokarbonolja från maskplockets spets. Placera täcksplåstren med de monterade maskarna på injektionsmikroskopet.
Byt till en hög förstoring och flytta nålen intill gonadarmen, motsvarande regionen nära atomkärnorna i mitten till sent pachyten. Med hjälp av mikromanipulatorn, flytta nålen mot masken, tryck ner nagelbandet något. Sedan, med en hand, knacka på sidan av mikroskopstadiet för att skaka nålen genom nagelbandet.
När maskarna har injicerats, ta bort täcket i agarosplattan och placera den under ett dissekerande mikroskop. Utför denna behandling för att frigöra maskarna från agar. Efter 10 minuter, när maskarna slår runt i bufferten, flytta dem till en NG-agarplatta med OP50-bakterier med hjälp av den dragna kapillärpipetten. Placera plattan på 20 grader Celsius i två till tre timmar tills maskarna har återhämtat sig och rör sig runt. När de har återhämtat sig, överför individuellt maskarna till NG agarplattor med OP50 Överför sedan plattorna till en 25 grader Celsius inkubator.
