全细胞补丁夹钳电生理学：研究神经元电特性的方法

- 首先将含有样品的录音室放在显微镜阶段，其成分与生理细胞外环境或细胞质相匹配。推进记录微管，即装有银电极的移液器，沐浴在电解质溶液中，模仿细胞内条件，通过施加正压，向神经元方向移动，并与细胞膜接触。

轻轻地从正压切换到负压，在膜和移液器之间形成紧密的密封。在放大器上设置一个保持电位，以保持电池在恒定的电压下。然后通过吸力在微皮圈内破裂细胞膜。

一旦细胞膜破裂，保持潜力会导致离子通过电压门离子通道流动，产生膜电位，由记录电极记录。 立即记录膜电位。 记录电极将信号传输到反馈放大器，从保持电位中减去膜电位-示波器，显示膜电位的视觉显示，以及计算机。 在下列协议中，我们将对斑马鱼胚胎中的毛特纳细胞进行贴片夹子测量。

-要准备贴片夹紧，首先在水平拉力器中用薄壁的薄壁薄氧酸盐玻璃拉一些贴片夹钳。在将火抛光到光滑边缘后，Pipette 尖端直径约为 0.2至 0.4 微米，刀柄锥度约为 4 毫米长。

将尖端浸入细胞内流体中，用细胞内溶液填充移液器尖端。然后在移液器中插入注射器针头，然后轻轻地从注射器中排出细胞内溶液，以完成对移液器的填充。将移液器连接到电生理学设置中的放大器头阶段。保持头部舞台与水平轴大约45 度角非常重要，因为这样可以确保移液器的入口角度适合与 Mauthner细胞形成高电阻密封。

就在移液器降低到浴缸溶液之前，向移液器施加少量正压，以减少尖端阻塞的机会。继续使用移液器中少量的正压接近 M 细胞。正压轻轻地将细胞从一侧推到另一侧，当定位在细胞上时，在细胞膜上形成一个小酒窝。

现在，将移液器放置几秒钟，轻轻清洁细胞表面，以便在移液器和膜之间形成强烈的密封，然后释放移液器中的正压以启动密封。少量负压，加上负移液器电位，可在几秒钟内形成千兆欧姆密封。

随后，将放大器中的保持电位更改为负60 毫伏。 用一系列短脉冲冲破细胞膜。然后立即记录膜电位，并最大限度地减少电容文物。 补偿细胞电容和访问电阻 70% 至 85%。

访问电阻应每30秒监测到1分钟，如果有20%或以上的变化，中止实验。一旦实验结束，获得足够的数据，就用一对钳子去除后脑来牺牲胚胎。