全細胞パッチクランプ電気生理学:ニューロンの電気的性質を研究する方法

-サンプルを含む記録室を浴液中に置き、その組成物が生理学的細胞外環境または細胞質と一致する顕微鏡ステージに入れ、記録マイクロピペット、電解質溶液に浸けた銀電極を含むピペットを進め、細胞内条件を模倣する電解液を、前圧を加えてニューロンに向かって、細胞膜に接触させる。

正圧から陰圧にそっと切り替えて膜とピペットの間に密閉力を形成し、一定の電圧でセルを維持するためにアンプに保持電位を設定し、吸引を加えてマイクロピペット内の細胞膜を破裂させます。

細胞膜が破裂すると、 保持電位は、電圧ゲートイオンチャネルを介してイオンの流れを引き起こし、記録電極によって記録される膜電位を作成します。記録電極は、膜電位の視覚的表示を提示するオシロスコープとコンピュータから膜電位を差し引いたフィードバックアンプに信号を送信します。

パッチクランプの準備をするには、水平な引き手に薄壁のホウケイ酸ガラスを備えたパッチクランプピペットを引っ張ることから始めます。

ピペットチップを細胞内液に浸して細胞内溶液で満たします。次に、注射器に注射針を挿入し、注射器から細胞内溶液を穏やかに排出してピペットを充填し終えます。

ピペットが浴液に下がる直前に、ピペットに少量の正圧を加えてチップがブロッキングする可能性を減らす。ピペット中のわずかな正圧でM細胞に近づき続ける。正圧は細胞を左右に静かに押し出し、細胞の上にすぐに置くと、細胞膜に小さなディンプルを形成する。

さて、ピペットと膜の間に強いシールが形成されるように、ピペットを数秒間所定の位置に置いてセル表面を静かにきれいにします。

その後、アンプの保持電位をマイナス60ミリボルトに変更し、一連の短いパルスで細胞膜を破裂させる。

アクセス抵抗は30秒から1分ごとに監視し、20%以上の変化がある場合は実験を中止します。