Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

In Vivo Elektroporasjon
 
Click here for the English version

In Vivo Elektroporasjon: En stedsspesifikk metode for transfekt sebrafisk

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Legg først en bedøvet fisk med dorsalsiden vendt opp i en for-fuktet svamp. Før elektroporasjon, injiser genetisk materiale i målvevet, i dette tilfellet, en del av forebrain kalt telencephalon. Deretter legger du en liten mengde ultralydgel hodet. Bruk også gelen elektrodens spiss for å lette effektiv drift. Plasser den positive elektroden ventralsiden av hodet og den negative elektroden dorsalsiden.

Trykk elektrodene forsiktig mot hodet og administrer flere pulser av elektrisk strøm. Strømmen skaper midlertidige porer i plasmamembranen til elektroporerte celler og gjør dem gjennomtrengelige. Strømmen letter også bevegelsen av negativt ladede partikler, for eksempel DNA-uttrykksplasmider eller RNAi oligonukleotider tilstede i omgivelsene, inn i cellene. I følgende eksempel vil vi bruke elektroporasjon for å introdusere en rekombinant plasmid i ependymogliale celler, stamceller som er ansvarlige for generering av nye nevroner.

- Dekk fisken telencephalon med en liten mengde ultralydgel. For elektroporasjon av det plasmidinnsprøytede dyret, fjern svampen fra utkasteroppsettet og senk den indre siden av elektrodespissene inn i ultralydgel. Plasser fiskehodet mellom elektrodene, med den positive elektroden ventralsiden av hodet og den negative elektroden dorsalsiden. Deretter, mens du fortsatt holder fiskens kropp i svampen, trykker du elektrodene forsiktig og presist mot telencephalon og administrerer strømmen med fotpedalen, holder elektrodene plass til alle fem pulsene er fullført.

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter