Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Plaats eerst een verdoofde vis met de dorsale kant naar boven gericht in een voorge bevochtigde spons. Injecteer vóór elektroporatie genetisch materiaal in het doelweefsel, in dit geval een deel van de voorhersenen genaamd het telencephalon. Plaats vervolgens een kleine hoeveelheid ultrasone gel op het hoofd. Breng de gel ook aan op de punt van de elektroden om een efficiënte werking te vergemakkelijken. Plaats de positieve elektrode op de ventrale kant van het hoofd en de negatieve elektrode aan de dorsale kant.
Druk nu de elektroden zachtjes tegen het hoofd en dien verschillende pulsen van elektrische stroom toe. De stroom creëert tijdelijke poriën in het plasmamembraan van elektroporated cellen en maakt ze doorlaatbaar. De stroom vergemakkelijkt ook de beweging van negatief geladen deeltjes, zoals DNA-expressieplasmiden of RNAi oligonucleotiden aanwezig in de omgeving, in de cellen. In het volgende voorbeeld zullen we elektroporatie gebruiken om een recombinant plasmide in ependymogliale cellen te introduceren.
- Bedek het telencephalon van de vis met een kleine hoeveelheid ultrasone gel. Voor elektroporatie van het plasmide-geïnjecteerde dier, verwijdert u de spons uit de uitwerpopstelling en dompelt u de binnenkant van de elektrodepunten onder in ultrasone gel. Plaats de viskop tussen de elektroden, met de positieve elektrode aan de ventrale kant van het hoofd en de negatieve elektrode aan de dorsale kant. Druk vervolgens, terwijl u het lichaam van de vis in de spons houdt, de elektroden voorzichtig en precies tegen de telencephalon. klaar zijn.
