In Vivo Elektroporation: Eine standortspezifische Methode zur Transfektion von Zebrafischen

- Legen Sie zunächst einen anästhesierten Fisch mit der Dorsalseite nach oben in einen vorbenetzten Schwamm. Vor der Elektroporation, injizieren genetisches Material in das Zielgewebe, in diesem Fall ein Teil des Vorderhirns genannt telencephalon. Als nächstes legen Sie eine kleine Menge Ultraschallgel auf den Kopf. Tragen Sie auch das Gel auf die Spitze der Elektroden, um eine effiziente Bedienung zu erleichtern. Legen Sie die positive Elektrode auf der ventralen Seite des Kopfes und die negative Elektrode auf der dorsalen Seite.

Drücken Sie nun die Elektroden vorsichtig gegen den Kopf und leiten Sie mehrere Impulse des elektrischen Stroms. Der Strom erzeugt temporäre Poren in der Plasmamembran von elektroporated Zellen und macht sie durchlässig. Der Strom erleichtert auch die Bewegung von negativ geladenen Teilchen, wie DNA-Expressionsplasmide oder RNAi-Oligonukleotide in der Umgebung, in die Zellen. Im folgenden Beispiel werden wir Elektroporation verwenden, um ein rekombinantes Plasmid in ependymogliade Zellen einzuführen, Stammzellen, die für die Erzeugung von Neuen zellen verantwortlich sind.

- Bedecken Sie den Fisch Telencephalon mit einer kleinen Menge Ultraschallgel. Für die Elektroporation des Plasmid-injizierten Tieres, Entfernen Sie den Schwamm aus dem Auswurf und tauchen Sie die Innenseite der Elektrodenspitzen in Ultraschallgel ein. Positionieren Sie den Fischkopf zwischen den Elektroden, mit der positiven Elektrode an der ventralen Seite des Kopfes und der negativen Elektrode auf der Rückenseite. Dann, während Sie den Körper des Fisches noch im Schwamm halten, drücken Sie die Elektroden sanft und präzise gegen das Telencephalon und verabreichen Sie den Strom mit dem Fußpedal, halten Sie die Elektroden an fertig sind.