التصور وتحليل حجم الأميبا لأنواع الشوكميبة

للبدء ، ضع سلالات الشوكميبة تحت مجهر المجال الساطع. تصور الأميبا عند تكبير 4x حيث تظهر الخلفية باللون الرمادي الفاتح والأميبا داكنة. اضبط إضاءة المجهر وتركيزه لضمان ظهور الأميبا كدوائر سوداء صلبة.

ثم قم بتكوين برنامج التصوير للتسجيل على فترات منتظمة بفجوة أقصاها 30 ثانية بين الصور لتتبع دقيق. تتبع الأميبا على مدار عدة أيام ، وسجل في أجزاء من ساعة واحدة لكل 12 ساعة على مدار خمسة أيام. إذا سمح المجهر والبرنامج ، فاستخدم إحداثيات XY لتسجيل آبار متعددة أو مواقع خلايا التدفق في جلسة واحدة.

إذا لزم الأمر ، قم بتجميع أقسام متعددة معا من بئر واحد أو خلية تدفق واحدة للحصول على عرض موسع بتكبير 4x. افتح ملف المجهر في برنامج التصوير. يظهر الآن مربع حوار خيارات استيراد التنسيق الحيوي.

ضمن مربع الحوار ، قم بتمكين عرض المكدس ، وتعيين العرض باستخدام إلى تحديد hyperstack. ثم تحقق من استخدام المكدس الظاهري ضمن إدارة الذاكرة واضبط وضع الألوان على الوضع الافتراضي. افتح الآن خيارات سلسلة التنسيق الحيوي وحدد السلسلة المطلوبة.

ثم اضغط على موافق. انتقل إلى الصورة ، ثم حدد تكرار لتكرار صورة بئر واحد فقط عن طريق اختيار قناة C واحدة وقناة Z واحدة فقط. العمل حصرا مع الصورة المكررة لمزيد من التلاعب. انقر على الصورة متبوعة بالنوع و 8 بت لتحويل الصورة.

ثم اختر العملية متبوعة بطرح الخلفية. اضبط الكرة المتدحرجة على 10. تحقق من خيار الخلفية الخفيفة وحدد انزلاق مكافئ.

انتقل الآن إلى العملية متبوعة بالتباين المحسن. اضبط إعدادات البيكسل المشبع إلى 0.1٪ للتروفوزيت الفردي، أو 0.3٪ لمجموعات الخلايا والتجميعات. انقر بالتتابع على الصورة واضبطها وعتبة افتراضيا أكبر من الأسود والأبيض.

سيؤدي هذا إلى فتح إعدادات العملية الثنائية. اختر الافتراضي وتحقق من الخلفية السوداء للأقنعة الثنائية. اضبط العتبة بقوة لتقليل ضوضاء الخلفية مع التأكد من أن كل أميبا مرئية جزئيا.

إذا قام البرنامج بعكس الألوان لجعل الخلفية بيضاء والأميبا سوداء ، فانتقل إلى التحرير وانقر على عكس لتبديلها إلى خلفية سوداء مع أميبا بيضاء. الآن انقر بالتتابع على العملية ، متبوعة بثنائية وقريبة لربط الفجوات الطفيفة في الغشاء الخارجي للخلايا. املأ أي ثقوب متبقية بالنقر فوق العملية والثنائية وملء الثقوب.

ثم استخدم أداة رسم الشكل واضغط على تحرير متبوعا بتعبئة لإزالة أي قطع أثرية غير أميبا. إذا لزم الأمر ، اعكس الصورة مرة أخرى لإنهاء التمثيل الثنائي. لتسجيل حجم كل أميبا ، انقر فوق تحليل ، متبوعا بتحليل الجزيئات.

ثم اضبط الحجم على 10 إلى ما لا نهاية ، والدائرية بين صفر إلى واحد والعرض إلى لا شيء. تحقق من نتائج العرض الوحيدة وخيار التلخيص للحصول على التحليل بدون مرئيات إضافية. احفظ النتيجة في ملفات CSV ، ثم انقر فوق ملف ، متبوعا بحفظ باسم و TIFF لحفظ الصورة بتنسيق TIFF.

قم بتحرير الاسم كما هو مطلوب.