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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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À Vivo Électroporation

 
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À Vivo Électroporation : une méthode spécifique au site pour transfecter le poisson zèbre

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- Tout d’abord, placez un poisson anesthésié avec le côté dorsal face vers le haut dans une éponge pré-mouillée. Avant l’électroporation, injecter du matériel génétique dans le tissu cible, dans ce cas, une partie du cerveau antérieur appelée télencéphale. Ensuite, mettez une petite quantité de gel à ultrasons sur la tête. Aussi, appliquez le gel sur le bout des électrodes pour faciliter le fonctionnement efficace. Placez l’électrode positive sur le côté ventral de la tête et l’électrode négative sur le côté dorsal.

Maintenant, appuyez doucement sur les électrodes contre la tête et administrer plusieurs impulsions de courant électrique. Le courant crée des pores temporaires dans la membrane plasmatique des cellules électroporées et les rend perméables. Le courant facilite également le mouvement des particules chargées négativement, telles que les plasmides d’expression de l’ADN ou les oligonucléotides RNAi présents dans les cellules environnantes, dans les cellules. Dans l’exemple suivant, nous utiliserons l’électroporation pour introduire un plasmide recombinant dans les cellules épendymogliales, cellules souches responsables de la génération de nouveaux neurones.

- Couvrir le poisson telencéphalon avec une petite quantité de gel à ultrasons. Pour l’électroporation de l’animal injecté par plasmide, retirer l’éponge de l’éjection mise en place et plonger le côté intérieur des pointes de l’électrode dans le gel à ultrasons. Placer la tête de poisson entre les électrodes, avec l’électrode positive sur le côté ventral de la tête et l’électrode négative sur le côté dorsal. Puis, tout en maintenant le corps du poisson dans l’éponge, appuyez sur les électrodes doucement et précisément contre le telencéphalon et administrer le courant avec la pédale, en tenant les électrodes en place jusqu’à ce que les cinq impulsions sont terminés.

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