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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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वीवो में इलेक्ट्रोपाउशन

 
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वीवो में इलेक्ट्रोपाउशन: ज़ेब्राफिश को ट्रांसफेक्ट करने के लिए एक साइट-विशिष्ट विधि

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- सबसे पहले, एक एनेस्थेटाइज्ड मछली को एक पूर्व-गीले स्पंज में सामना करने वाले पृष्ठीय पक्ष के साथ रखें। इलेक्ट्रोपाउशन से पहले, अनुवांशिक सामग्री को लक्षित ऊतक में इंजेक्ट करें, इस मामले में, पूर्वाभास का एक हिस्सा जिसे टेलेंसेफेलन कहा जाता है। इसके बाद, सिर पर थोड़ी मात्रा में अल्ट्रासाउंड जेल डालें। कुशल संचालन को सुविधाजनक बनाने के लिए इलेक्ट्रोड की नोक पर जेल लगाएं। सकारात्मक इलेक्ट्रोड को सिर के वेंट्रल साइड पर और निगेटिव इलेक्ट्रोड को पृष्ठीय तरफ रखें।

अब, इलेक्ट्रोड को सिर के खिलाफ धीरे से दबाएं और विद्युत धारा की कई दालों को प्रशासित करें। वर्तमान इलेक्ट्रोपोरेटेड कोशिकाओं की प्लाज्मा झिल्ली में अस्थायी छिद्र बनाता है और उन्हें पारम कर देता है। वर्तमान भी नकारात्मक आवेशित कणों के आंदोलन की सुविधा, जैसे डीएनए अभिव्यक्ति प्लाज्मिड या RNAi ओलिगोन्यूक्लियोटाइड आसपास में मौजूद, कोशिकाओं मेंनिम्नलिखित उदाहरण में, हम इलेक्ट्रोपॉशन का उपयोग करने के लिए ependymoglial कोशिकाओं में एक recombinant प्लाज्मिड शुरू करने के लिए, स्टेम सेल नए न्यूरॉन्स की पीढ़ी के लिए जिंमेदार है

- मछली टेलेंसेफलन को थोड़ी मात्रा में अल्ट्रासाउंड जेल से कवर करें। प्लाज्मिड-इंजेक्शन वाले जानवर के इलेक्ट्रोपॉनेशन के लिए, स्थापित रिजेक्शन से स्पंज को हटा दें और इलेक्ट्रोड टिप्स के भीतरी हिस्से को अल्ट्रासाउंड जेल में विसर्जित कर दें। इलेक्ट्रोड के बीच मछली सिर की स्थिति, सिर के वेंट्रल साइड में सकारात्मक इलेक्ट्रोड के साथ और पृष्ठीय पक्ष पर नकारात्मक इलेक्ट्रोड। फिर, जबकि अभी भी स्पंज में मछली के शरीर को पकड़, इलेक्ट्रोड धीरे और ठीक telencephalon के खिलाफ प्रेस और पैर पेडल के साथ वर्तमान प्रशासन, जगह में इलेक्ट्रोड पकड़े जब तक सभी पांच दालों समाप्त हो गए हैं।

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