In Vivo Elettroporazione: un metodo site-specific per trasfetto Zebrafish

In primo luogo, Posizionare un pesce anestetizzato con il lato dorsale rivolto verso l'alto in una spugna pre-bagnata. Prima dell'elettroporazione, iniettare materiale genetico nel tessuto bersaglio, in questo caso una parte del proencefalo chiamata telencefalo. Successivamente, mettere una piccola quantità di gel ad ultrasuoni sulla testa. Inoltre, applicare il gel sulla punta degli elettrodi per facilitare un funzionamento efficiente. Posizionare l'elettrodo positivo sul lato ventrale della testa e l'elettrodo negativo sul lato dorsale.

Ora, premere delicatamente gli elettrodi contro la testa e somministrare diversi impulsi di corrente elettrica. La corrente crea pori temporanei nella membrana plasmatica delle cellule elettroporate e li rende permeabili. La corrente facilita anche il movimento delle particelle cariche negativamente, come i plasmidi di espressione del DNA o gli oligonucleotidi RNAi presenti nell'ambiente circostante, nelle cellule. Nell'esempio seguente, useremo l'elettroporazione per introdurre un plasmide ricombinante nelle cellule ependimogliali, cellule staminali responsabili della generazione di nuovi neuroni.

- Coprire il telencefalo di pesce con una piccola quantità di gel ad ultrasuoni. Per l'elettroporazione dell'animale iniettato dal plasmide, rimuovere la spugna dall'espulsione impostata e immergere il lato interno dell'elettrodo punta nel gel ad ultrasuoni. Posizionare la testa del pesce tra gli elettrodi, con l'elettrodo positivo sul lato ventrale della testa e l'elettrodo negativo sul lato dorsale. Quindi, pur tenendo il corpo del pesce nella spugna, premere gli elettrodi delicatamente e precisamente contro il telencefalo e somministrare la corrente con il pedale del piede, tenendo gli elettrodi in posizione fino a tutti e cinque gli impulsi sono finiti.