Optimalisatie en in vivo vermeerdering van CellTrace Far Red (CT-FR) gekleurde zebravis T-ALL cellen

Verzamel om te beginnen een keer 10 tot de macht van zes fluorescerend gelabelde zebravissen, T-ALL-cellen in microcentrifugebuisjes van 1,5 milliliter. Centrifugeer de cellen bij 2.500 G gedurende vijf minuten bij vier graden Celsius en resuspendeer de pellet in één milliliter 0,9 XPBS. Doe 250 microliter celsuspensie in een microcentrifugebuisje.

Voeg vervolgens 250 microliter 0,9 XPBS toe om het volume op 500 microliter te brengen. Voeg het benodigde volume CT-FR Dye-bouillonoplossing toe en incubeer gedurende 20 minuten bij 37 graden Celsius, ter bescherming tegen licht. Centrifugeer de cellen bij 2.500 G gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur.

Voeg 500 microliter vismedia toe om de overtollige kleurstof te verwijderen en centrifugeer opnieuw voordat u de pellet opnieuw suspendeert in 25 microliter vismedia. Kleur de cellen met trypanblauw en onderzoek ze onder de microscoop op levensvatbaarheid. Gebruik de geoptimaliseerde CT-FR-concentratie om de zebraviscellen te kleuren en sommige tumorcellen ongekleurd te laten.

Injecteer met een Hamilton-injectiespuit vijf microliter gekleurde en ongekleurde celsuspensie in de intraperitoneale holte van verdoofde zebravissen.