51 Views
•
01:47 min
•
July 19, 2024
DOI:
Transcript
Automatically generated
כדי להתחיל, אספו פעם אחת 10 בחזקת שישה דגי זברה המסומנים באופן פלואורסצנטי, תאי T-ALL בצינורות מיקרוצנטריפוגות של 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה את התאים ב 2, 500 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס ו resuspend את הגלולה במיליליטר אחד של 0.9 XPBS. הכניסו 250 מיקרוליטר של תרחיף תאים לצינור מיקרוצנטריפוגה.
לאחר מכן, הוסף 250 מיקרוליטר של 0.9 XPBS כדי להביא את הנפח עד 500 מיקרוליטר. הוסף את הנפח הנדרש של תמיסת CT-FR Dye ודגרה במשך 20 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, הגנה מפני אור. צנטריפוגה את התאים ב 2, 500 גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.
הוסיפו 500 מיקרוליטר של מצע דגים כדי להסיר שוב את עודפי הצבע והצנטריפוגה לפני שתשהו מחדש את הגלולה ב-25 מיקרוליטר של מצע דגים. צבעו את התאים בכחול טריפאן ובחנו אותם תחת המיקרוסקופ לכדאיות. באמצעות ריכוז CT-FR אופטימלי, להכתים את תאי דג הזברה ולהשאיר חלק מתאי הגידול ללא כתמים.
באמצעות מיקרומזרק המילטון, להזריק חמישה מיקרוליטרים של תרחיף תאים מוכתמים ולא מוכתמים לתוך החלל intraperitoneal של דג זברה מורדם.
Read Article
Cite this Article
Optimization and In Vivo Propagation of CellTrace Far Red (CT-FR) Stained Zebrafish T-ALL Cells. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e201976, doi:10.3791/201976 (2024).
Copy