Ottimizzazione e propagazione in vivo di cellule T-ALL di pesce zebra colorate con CellTrace Far Red (CT-FR)

Per iniziare, raccogli una volta 10 alla potenza di sei cellule T-ALL marcate con fluorescenza di zebrafish in provette da microcentrifuga da 1,5 millilitri. Centrifugare le celle a 2.500 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius e risospendere il pellet in un millilitro di 0,9 XPBS. Mettere 250 microlitri di sospensione cellulare in una provetta da microcentrifuga.

Quindi, aggiungi 250 microlitri di 0,9 XPBS per portare il volume fino a 500 microlitri. Aggiungere il volume richiesto di soluzione madre di colorante CT-FR e incubare per 20 minuti a 37 gradi Celsius, proteggendo dalla luce. Centrifugare le celle a 2.500 G per cinque minuti a temperatura ambiente.

Aggiungere 500 microlitri di terreno di coltura per pesci per rimuovere il colorante in eccesso e centrifugare nuovamente prima di risospendere il pellet in 25 microlitri di terreno di coltura per pesci. Colorare le cellule con il blu di tripano ed esaminarle al microscopio per verificarne la vitalità. Utilizzando la concentrazione ottimizzata di CT-FR, colorare le cellule del pesce zebra e lasciare alcune cellule tumorali non colorate.

Utilizzando una microsiringa di Hamilton, iniettare cinque microlitri di sospensione cellulare colorata e non colorata nella cavità intraperitoneale di zebrafish anestetizzato.