Otimização e propagação in vivo de células T-ALL de peixe-zebra coradas com CellTrace Far Red (CT-FR)

Para começar, colete uma vez 10 elevado a seis células-zebrafish marcadas com fluorescência, T-ALL em tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitro. Centrifugar as células a 2.500 G durante cinco minutos a quatro graus Celsius e ressuspender o pellet num mililitro de 0,9 XPBS. Coloque 250 microlitros de suspensão celular em um tubo de microcentrífuga.

Em seguida, adicione 250 microlitros de 0,9 XPBS para aumentar o volume para 500 microlitros. Adicione o volume necessário de solução estoque de corante CT-FR e incube por 20 minutos a 37 graus Celsius, protegendo da luz. Centrifugar as células a 2 500 g durante cinco minutos à temperatura ambiente.

Adicione 500 microlitros de meio de peixe para remover o excesso de corante e centrifugue novamente antes de ressuspender o pellet em 25 microlitros de meio de peixe. Pinte as células com azul de tripano e examine-as ao microscópio quanto à viabilidade. Usando a concentração otimizada de CT-FR, core as células do peixe-zebra e deixe algumas células tumorais sem coloração.

Usando uma microsseringa de Hamilton, injete cinco microlitros de suspensão celular corada e não corada na cavidade intraperitoneal do peixe-zebra anestesiado.