Оптимизация и размножение in vivo окрашенных CellTrace Far Red (CT-FR) T-ALL клеток данио-рерио

Для начала соберите один раз 10 в степени шести флуоресцентно меченых рыбок данио, Т-ОЛЛ клеток в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 миллилитров. Центрифугируйте ячейки при 2500 G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия и повторно суспендируйте гранулу в одном миллилитре 0,9 XPBS. Поместите 250 микролитров клеточной суспензии в микроцентрифужную пробирку.

Затем добавьте 250 микролитров 0,9 XPBS, чтобы довести объем до 500 микролитров. Добавьте необходимый объем стокового раствора красителя CT-FR и выдерживайте в течение 20 минут при температуре 37 градусов Цельсия, защищая от света. Центрифугируйте клетки при 2 500 G в течение пяти минут при комнатной температуре.

Добавьте 500 микролитров рыбной среды, чтобы удалить излишки красителя, и снова центрифугируйте перед тем, как снова суспендировать гранулу в 25 микролитрах рыбной среды. Покрасьте клетки трипановым синим и рассмотрите их под микроскопом на жизнеспособность. Используя оптимизированную концентрацию CT-FR, окрасьте клетки рыбок данио и оставьте некоторые опухолевые клетки неокрашенными.

С помощью микрошприца Гамильтона введите пять микролитров окрашенной и неокрашенной клеточной суспензии во внутрибрюшинную полость рыбок данио, находящихся под наркозом.