Optimización y propagación in vivo de células T-ALL de pez cebra teñidas con CellTrace Far Red (CT-FR)

Para empezar, recoja una vez 10 elevado a la potencia de seis células T-ALL de pez cebra marcadas con fluorescencia en tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitros. Centrifugar las células a 2.500 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados y resuspender el pellet en un mililitro de 0,9 XPBS. Coloque 250 microlitros de suspensión celular en un tubo de microcentrífuga.

A continuación, añade 250 microlitros de 0,9 XPBS para subir el volumen a 500 microlitros. Añadir el volumen necesario de solución madre CT-FR Dye e incubar durante 20 minutos a 37 grados centígrados, protegiendo de la luz. Centrifugar las células a 2.500 g durante cinco minutos a temperatura ambiente.

Agregue 500 microlitros de sustrato de pescado para eliminar el exceso de colorante y vuelva a centrifugar antes de volver a suspender el pellet en 25 microlitros de medio de pescado. Tiñe las células con azul de tripán y examínalas bajo el microscopio para determinar su viabilidad. Usando la concentración optimizada de CT-FR, tiñe las células del pez cebra y deja algunas células tumorales sin teñir.

Con una microjeringa Hamilton, inyecte cinco microlitros de suspensión celular teñida y no teñida en la cavidad intraperitoneal del pez cebra anestesiado.