CellTrace Far Red (CT-FR) Lekeli Zebra Balığı T-ALL Hücrelerinin Optimizasyonu ve In Vivo Çoğaltılması

Başlamak için, 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerinde floresan etiketli altı zebra balığı, T-ALL hücresinin gücüne bir kez 10 toplayın. Hücreleri 2.500 G’de dört santigrat derecede beş dakika boyunca santrifüjleyin ve peleti bir mililitre 0.9 XPBS’de yeniden süspanse edin. 250 mikrolitre hücre süspansiyonunu bir mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin.

Ardından, hacmi 500 mikrolitreye çıkarmak için 250 mikrolitre 0,9 XPBS ekleyin. Gerekli hacimde CT-FR Boya stoğu çözeltisini ekleyin ve ışıktan koruyarak 37 santigrat derecede 20 dakika inkübe edin. Hücreleri oda sıcaklığında beş dakika boyunca 2.500 G’de santrifüjleyin.

Fazla boyayı çıkarmak için 500 mikrolitre balık ortamı ekleyin ve peleti 25 mikrolitre balık ortamında yeniden süspanse etmeden önce tekrar santrifüjleyin. Hücreleri tripan mavisi ile boyayın ve canlılık açısından mikroskop altında inceleyin. Optimize edilmiş CT-FR konsantrasyonunu kullanarak, zebra balığı hücrelerini boyayın ve bazı tümör hücrelerini lekesiz bırakın.

Bir Hamilton mikroşırıngası kullanarak, anestezi uygulanmış zebra balığının intraperiton boşluğuna beş mikrolitre lekeli ve lekesiz hücre süspansiyonu enjekte edin.