器官条件介质：从收获的器官细胞生成介质用于转移性癌症研究

某些器官产生可溶性因素，成为乳腺癌转移的优先场所。从这些收获的器官细胞中制备的有条件的介质可能有助于识别和研究这些因素。

首先将收获的器官（如肝脏）放入含有冷 PBS 的管中，然后上下翻转管子以去除器官残留的血液。将器官放在培养皿中。使用手术刀，将器官切成小块。

将这些碎片重新送入含有基底介质的管子中，并辅以抗生素，以支持细胞生长和防止污染。现在，将细胞悬浮物倒入培养板中，在37摄氏度下孵化，在规定持续时间内连续供应二氧化碳。

在孵化过程中，这些细胞将代谢物、生长因子、细胞外基质蛋白释放到介质中。接下来，将细胞悬架转移到离心机管中，并添加新鲜介质稀释它。将管子离心，将超母体（即条件介质）过滤成新鲜的管子。

在下列协议中，我们将准备来自小鼠肺部和大脑的有条件介质，以研究乳腺癌细胞的转移行为。

要生成肺条件介质，将肺组织管倒置三次，以去除器官中的任何残留血液。然后用新鲜的冷 PBS 代替洗涤，重复，直到盐水无血。

接下来，将肺转移到每只老鼠一个60平方毫米的玻璃培养皿中，然后使用两个无菌手术刀刀片来切碎反复来回切片的组织。

当组织碎片大小约为1毫米时，以适当体积的DMEM/F-12介质补充抗生素，在37摄氏度和5%的二氧化碳下，将组织孵化在每只小鼠6井板的一口井中。

24 小时后，将每口油井的全部内容转移到单独的 50 毫升圆锥管中，用每管三个等量的新鲜 DMEM/F-12 介质稀释条件介质。

将管子离心，以清除任何大块组织碎片。然后通过 0.22 微米注射器过滤器将有条件的介质集中到单个 50 毫升圆锥管中。