Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Vissa organ producerar lösliga faktorer och blir förmånliga platser för bröstcancermetastas. Ett konditionerat medium som framställs av dessa skördade organceller kan hjälpa till att identifiera och studera sådana faktorer.
Börja med att placera ett skördat organ som en lever i ett rör som innehåller kall PBS och vända röret upp och ner för att ta bort organets återstående blod. Lägg orgeln i en petriskål. Och med hjälp av en skalpell, tärna organet i små bitar.
Återanvänd dessa bitar i ett rör som innehåller ett basalt medium kompletterat med ett antibiotikum för att stödja celltillväxt och förhindra förorening. Häll nu cellupphängningen i en odlingsplatta och inkubera vid 37 grader Celsius med en kontinuerlig koldioxidtillförsel under den önskade varaktigheten.
Under inkubation frigör dessa celler metaboliter, tillväxtfaktorer, extracellulära matrisproteiner i mediet. Överför sedan cellfjädringen till ett centrifugrör och tillsätt nytt medium för att späda ut det. Centrifugera röret och filtrera supernatanten, som är det konditionerade mediet, till ett nytt rör.
I följande protokoll kommer vi att förbereda konditionerade medier från mus lungorna, och hjärnan för att studera ögonbevarande beteendet hos bröstcancerceller.
För att generera lung konditionerat medium, invertera rören av lungvävnad tre gånger för att ta bort eventuellt kvarvarande blod från organen. Byt sedan ut tvätten mot färsk kall PBS och upprepa tills saltlösningen är blodfri.
Överför sedan lungorna till en 60 kvadrat millimeters petriskål per mus och använd två sterila skalpellblad för att hacka vävnaderna med upprepad fram och tillbaka skivning.
När vävnadsfragmenten är ungefär 1 millimeter kubiserade i storlek, återanvänd bitarna i lämplig volym DMEM / F-12 medium kompletterat med antibiotika och inkubera vävnaderna i en brunn av en 6-brunnsplatta per mus vid 37 grader Celsius och 5% CO2.
Efter 24 timmar överför du hela innehållet i varje brunn till enskilda koniska rör med 50 milliliter och späd ut det konditionerade mediet med tre motsvarande volymer färskt DMEM/F-12 medium per rör.
Centrifugera rören för att avlägsna alla stora bitar av vävnadsskräp. Slå sedan ihop det konditionerade mediet genom en 0,22 mikron spruta sil i ett enda 50 milliliter koniskt rör.
