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Chapters
- 00:05Title
- 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
- 03:54Culturing and Sonication
- 05:26Affinity Purification
- 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
- 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
- 11:02Results
- 14:27Conclusion
La purification par affinité des protéines marquées en combinaison avec la spectrométrie de masse (APMS) est une méthode puissante pour la cartographie systématique des réseaux d'interactions protéiques et d'enquêter sur le fondement mécaniste des processus biologiques. Ici, nous décrivons un peptide optimisé séquentielle d'affinité (SPA) procédure APMS développé pour la bactérie<em> Escherichia coli</em> Qui peut être utilisé pour isoler et caractériser stables complexes multi-protéiques jusqu'à homogénéité à partir de près de même faible nombre de copies par cellule.
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