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Chapters
- 00:05Title
- 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
- 03:54Culturing and Sonication
- 05:26Affinity Purification
- 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
- 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
- 11:02Results
- 14:27Conclusion
Purificazione di affinità di proteine marcate, in combinazione con la spettrometria di massa (APMS) è un potente metodo per la mappatura sistematica delle reti di interazione di proteine e per indagare la base meccanicistica dei processi biologici. Qui, descriviamo un ottimizzato sequenziale peptide affinità (SPA) APMS procedura sviluppata per il batterio<em> Escherichia coli</em> Che possono essere utilizzati per isolare e caratterizzare stabili multi-complessi proteici alla quasi omogeneità anche partendo da bassi numeri di copie per cellula.
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