A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
- 03:54Culturing and Sonication
- 05:26Affinity Purification
- 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
- 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
- 11:02Results
- 14:27Conclusion
Affinitetsrensing av kodede proteiner i kombinasjon med massespektrometri (APMS) er en kraftig metode for systematisk kartlegging av protein interaksjon nettverk og for å undersøke den mekanistiske grunnlag av biologiske prosesser. Her beskriver vi en optimalisert sekvensiell peptid affinitet (SPA) APMS prosedyre utviklet for bakterien<em> Escherichia coli</em> Som kan brukes til å isolere og karakterisere stabile multi-protein komplekser til nær homogenitet selv starter fra lave kopiere numre per celle.
Tags
Protein ComplexesEscherichia ColiSequential Peptide Affinity PurificationTandem Mass SpectrometryProtein-protein InteractionsSubunit CompositionGene FunctionBiological SystemsAffinity PurificationMass SpectrometryChromosomally-tagged ProteinsCarboxy-terminal Sequential Peptide Affinity (SPA) Dual Tagging SystemGram-negative Escherichia ColiGenetically-tractable Host Laboratory StrainsGenome-wide InvestigationsProkaryotesTandem Affinity Purification MethodCalmodulin Binding Peptide (CBP)Tobacco Etch Virus
