다음 실험의 전반적인 목표는 확장성 심근병증 또는 자가면역 배경을 가진 기타 심장 질환 환자의 혈장 내 심장 친화성 항체를 검출하는 것입니다. 이는 두 번째 단계인 면역글로불린 G 정제를 위해, 항 IgG spheros 컬럼을 이용하여 환자 혈장을 1차 미니 면역 흡착함으로써 달성됩니다. 본 바이오어세이의 세포 기반을 제공하기 위해 성체 Wistar 쥐로부터 심실 심근세포를 분리합니다.
다음으로, 심근세포가 챔버 커버슬립에 부착되도록 한 뒤 URA 2:00 AM으로 염색하여 수축 중 세포 내 칼슘 과도 현상을 관찰할 수 있게 하고, 환자의 IgG를 테스트하여 심근세포 수축력에 미치는 영향을 관찰합니다. 그 결과는 분리된 심근세포의 수축력 및 칼슘 과도 현상의 변화를 바탕으로 환자의 IgG에 친화성 항체가 포함되어 있는지 여부를 입증합니다. 항체 검출을 위한 표준 면역 분석법과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 특정 항원에 의존하지 않으며, 자극 항체와 차단 항체를 구별할 수 있다는 점입니다.
이 절차의 시연은 Google 및 저희 실험실의 기술 지원을 통해 진행됩니다. 이 절차를 시작하려면, 빈 econopak 컬럼에 2 mL의 환자 EDTA 혈장당 3 mL의 anti IgG spheros를 채워 미니 면역 흡착 컬럼을 준비하십시오. 그다음, anti IgG spheros 위에 필터를 배치하십시오.
컬럼의 하단 팁을 절개하고 필터를 눌러 초당 약 한 방울의 유속이 되도록 조절합니다. 그런 다음 0.9% Sodium chloride 1플라스마 부피로 컬럼을 세 번 세척합니다. 플라스마가 anti IgG Spheros에 완전히 침전되면, 동일한 부피의 0.9% sodium chloride로 컬럼 내의 플라스마를 피펫팅하여 세척합니다. 다음으로 pH 2.8의 0.2 molar glycine hydrochloride 1플라스마 부피를 컬럼에 피펫팅하고 구슬(spheres)에 침전되도록 둡니다.
그 다음 글리신 염산염을 컬럼에 동일한 부피만큼 추가합니다. 유출액을 15 milliliter 튜브에 수집하고, pH 8.0의 0.5 molar tris 염산염을 사용하여 pH를 7.3으로 조절함으로써 컬럼을 재생합니다. 0.9% sodium chloride를 두 부피만큼 사용하여 최종 세척한 후, 글리신 염산염을 플라스마 부피의 3배만큼 사용하여 세척합니다.
해당 컬럼은 심근세포용 다음 혈장 샘플에 다시 사용할 수