本实验的总体目标是研究单纯疱疹病毒（HSV）的复发性感染。首先以特定方式感染小鼠，使其在不造成角膜损伤的情况下建立潜伏感染。在潜伏感染完全建立后，下一步通过暴露于中波紫外线（UVB）来重新激活病毒。最后一步是收集泪膜样本，以检测病毒脱落情况，并持续观察小鼠至少五周，以监测疾病进展。
最终，可通过评分疱疹性间质性角膜炎来评估小鼠中发生疾病的严重程度。这种疾病影响着全球许多人，是导致感染性失明的主要病因之一。
我们采用一种小鼠模型来模拟这种特定疾病。虽然还有其他模型也能模拟该疾病，但我们认为这一模型最能准确代表该疾病的特征。今天，我想花几分钟时间，向您介绍将在本视频中出现的各位人员。
这是与我一起工作了过去几个月的Chloe。这位是Nippo，一位在实验室工作的暑期学生。实验开始时，在T150培养瓶中将HSV-1在Vero细胞上培养三到四天，直至细胞融合度达到80%。
此时细胞已变圆，轻轻敲击培养瓶即可使细胞脱落。将细胞悬液转移至无菌的50毫升锥形管中，然后在台式离心机中于4°C、1,510 × g条件下离心15分钟。
接下来，将上清液转移至50毫升无菌橡树岭管中，然后将培养基总量的五毫升分装至每个锥形管中，用于重悬。重悬大颗粒沉淀后，将重悬的沉淀物以每32秒为一个脉冲，进行两次脉冲超声处理，每次持续一分钟。在高速落地式离心机中对上清液进行离心后，可获得少量病毒沉淀。
弃去上清液后，将沉淀与少量病毒颗粒混合，再次超声处理45秒。随后将超声处理后的细胞与病毒溶液在台式离心机中于280 × g、4 °C条件下再次离心5分钟，然后将上清液分装，作为病毒原液储存于-70 °C，用于后续滴度测定。
将病毒储存液上清从10⁰至10⁻⁸进行十倍系列稀释，取两组独立稀释液分别接种于12孔无菌培养板中的Vero细胞。开始感染程序前，先对小鼠实施麻醉。小鼠应持续完全麻醉20至30分钟，以确保在苏醒前病毒已被充分吸收。
然后在解剖显微镜下，使用30号针头划伤右眼角膜。现在通过耳缘打孔对动物进行编号。接下来，给小鼠注射一毫升混合人血清，以保护角膜在初次感染期间免受损伤。
然后使用20微升移液器将10的6次方空斑形成单位接种至划伤的眼部，并向另一只眼滴加5微升HBSS以保持湿润，同时动物处于麻醉状态以确认感染。用1毫升Vero培养基润湿一支无菌棉拭子。初次感染后三天，用该棉拭子擦拭感染眼，随后将拭子上的100微升培养液转移至培养于48孔板中的Vero细胞，这些细胞需在初次感染至少五周后使用。
如上所述，拭取麻醉小鼠的感染眼睛。在48孔板盖上标记拭取日期为第0天，以控制自发性闭眼的影响。然后将小鼠置于可发射峰值波长为302纳米UVB光的透射式紫外灯中，使仅单侧眼睛暴露于UVB光下，并给予每平方厘米250毫焦耳的UVB照射剂量。
然后从第1天到第7天每天对眼睛进行拭子取样。对于经UVB照射后含有传染性病毒的拭子样