本手順の全体的な目的は、単純ヘルペスウイルス（HSV）の再発感染を研究することである。まず、角膜損傷を与えずに潜在感染させる方法でマウスに感染させる。潜在感染が完全に成立した後、次のステップとしてUVB光に曝露してウイルスを再活性化させる。最終ステップでは、ウイルスシェディングを検出するために涙液を回収し、その後、疾患をモニタリングするためにマウスを少なくとも5週間観察する。

最終的に、マウスに生じた疾患の程度は、ヘルペス性ストローマ角膜炎の疾患スコアリングによって評価できます。これは世界中の多くの人々が罹患する疾患であり、特にこの疾患は、感染性失明の主要な原因の一つとなっています。

私たちは、この特定の疾患を模倣するためにマウスで使用しているモデルを有しています。この疾患を模倣できる他のモデルも存在しますが、これがこの特定の疾患を最もよく表現していると考えています。本日は、このビデオに登場する方々を数分かけてご紹介したいと思います。

こちらは、ここ数ヶ月間私と一緒に研究しているクロエです。そしてこちらは、夏季インターンとして研究室で働いているニッポです。まず、T150フラスコを用いてVero細胞でHSV-1を3〜4日間培養し、コンフルエンシーを80%まで高めてから、実験を開始します。

この時点までに細胞は丸まっており、フラスコを叩くことで容易に剥離します。細胞懸濁液を滅菌済みの50 milliliter コニカルチューブに移し、15分間遠心分離して細胞を沈殿させます。ベンチトップ遠心機を用い、4 °C、1,510 ×g で行います。

次に、上清を50 milliliterの滅菌済みオークリッジチューブに移し、その後、各コニカルチューブに合計5 milliliterの培地を分注して再懸濁します。大きなペレットを懸濁させ、再懸濁したペレットを32分の1秒のバーストで2回、1分間超音波処理します。高速床置き遠心機で上清を遠心分離すると、小さなウイルスペレットが得られます。

上澄み液を廃棄した後、細胞の沈殿物と少量のウイルスペレットを合わせ、再び45秒間超音波処理します。次に、超音波処理した細胞およびウイルス溶液を、ベンチトップ遠心機を用いて280 ×g、4 °Cで5分間再度遠心分離し、上澄み液を分注して、ウイルスストックとして-70 °Cで保存するか、タイタープレートに使用します。

ウイルスストックの上清を用いて、10⁰から10⁻⁸まで10倍段階希釈したウイルス液を2組用意し、12ウェル滅菌プレート内のVero細胞に添加します。マウスを麻酔することから感染手順を開始します。ウイルスが十分に吸収されるよう、マウスが覚醒するまで20～30分間は完全に麻酔状態を維持させる必要があります。

次に、実体顕微鏡下で30ゲージの針を用い、右眼の角膜を擦過します。その後、イヤーパンチで個体番号