이 실험 절차의 전반적인 목적은 재발성 단순 포진 바이러스(herpes simplex virus, HSV) 감염을 연구하는 것입니다. 우선 마우스의 각막 손상 없이 잠복 감염이 되도록 감염시킨 후, 잠복 상태가 완전히 확립되면 다음 단계로 UVB 광선에 노출시켜 바이러스를 재활성화합니다. 마지막 단계에서는 눈물막을 수집하여 바이러스 배출을 검출하고, 이후 최소 5주 동안 마우스를 관찰하며 질병 경과를 모니터링합니다.
최종적으로, 마우스에서 발생하는 질병의 정도는 헤르페스성 기질 각막염(Herpetic stromal keratitis)의 질환 점수 평가를 통해 측정할 수 있습니다. 이는 전 세계적으로 많은 사람에게 영향을 미치는 질병입니다. 특히 이 질환은 감염성 실명의 주요 원인 중 하나입니다.
저희는 이 특정 질환을 모사하기 위해 마우스 모델을 사용하고 있습니다. 이 질환을 모사할 수 있는 다른 모델들도 존재하지만, 저희는 이 모델이 해당 질환을 가장 잘 나타낸다고 판단합니다. 오늘 잠시 시간을 내어 이 영상에 등장할 분들을 소개해 드리겠습니다.
지난 몇 달 동안 저와 함께 일해 온 Chloe입니다. 이쪽은 실험실에서 근무 중인 하계 학생 Nippo입니다. T 150 플라스크에서 Vero 세포에 HSV one을 3~4일 동안 배양하여 80% confluence에 도달하게 하여 실험을 시작하십시오.
이 시점이면 세포들이 둥글게 말려 올라와 플라스크를 가볍게 쳐주는 것만으로도 쉽게 떨어져 나올 것입니다. 세포 현탁액을 멸균된 50 milliliter 원추형 튜브로 옮긴 후, 15분 동안 원심분리하여 세포를 침전시킵니다. 벤치탑 원심분리기를 사용하여 4 °C에서 1,510 ×g로 설정하십시오.
다음으로, 상층액을 50 milliliter 멸균 oak ridge 튜브로 옮기고, 총 5 milliliter의 배지를 각 원뿔형 튜브에 나누어 넣어 재현탁합니다. 큰 펠렛을 현탁시킨 후, 재현탁된 펠렛을 1/32초 간격의 버스트로 2회, 총 1분 동안 초음파 처리합니다. 고속 바닥 원심분리기로 상층액을 원심분리하면 작은 바이러스 펠렛이 생성됩니다.
상층액을 버린 후, 소량의 바이러스 펠릿과 함께 침전물을 혼합하고 45초 동안 다시 초음파 처리합니다. 이제 벤치탑 원심분리기를 사용하여 초음파 처리된 세포 및 바이러스 용액을 280 ×g, 4°C에서 5분 동안 다시 원심분리한 다음, 상층액을 분주하여 -70°C에서 바이러스 스톡으로 보관