Name: Ceratite herpética recorrente Estroma em camundongos, um modelo para estudar HSK Humanos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: Aprenda a estudar ceratite herpética recorrente em camundongos usando reativação viral por luz UVB. Este modelo reproduz a doença humana causada pelo HSV e auxilia no desenvolvimento de terapias para cegueira infecciosa.

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Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Jay Pepose para ajudar ensinando o modelo para nós. Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health Grants EY11885 (SPM), EY21247 (SPM) e uma concessão irrestrita de Pesquisa para prevenir a cegueira para o Departamento de Oftalmologia.

Nota Animal Care: Analgésicos não são utilizadas neste modelo uma vez que são anti-inflamatórios e, assim, invalidar o modelo. 1. Preparação de Vírus <ol><li> Crescer HSV-1 em células Vero (80% confluentes) utilizando uma diluição de partida de 0,01 multiplicidade de infecção (em balão T-150, cerca de 5 x 10 5 unidades formadoras de placa) durante 3-4 dias até que todas as células foram arredondados para cima e são facilmente retirados por bater o frasco. </li><li> Remova a mídia para tubos de centrífuga estéreis, e centrifugar na Sorvall Legend RT a 4 ° C e 3500 rpm durante 15 min. Depois de remover o sobrenadante (ver 1.3), ressuspender pellet grande de cada tubo de 50 ml com 5 ml de meios totais. Sonicar durante 1 min em dois bursts 30 seg. </li><li> Remover o sobrenadante e colocados em tubos de 50 ml estéreis, Oak Ridge e centrifugar a 9000 rpm, durante 1 hora a 4 ° C numa centrífuga Beckman J2-21. Isto é para produzir um sedimento pequeno viral. Descartar o sobrenadante. </li><li> Combine sonicate de 1,2 sagacidadeh pellet de 1,3 e sonicar novamente por 45 segundos. Centrífuga Sorvall Legend em RT a 1.500 rpm durante 5 min a 4 ° C. Salve o sobrenadante. Esta constitui a reserva de vírus, que é dividido em alíquotas e armazenado a -70 ° C. </li><li> Vírus de título em células Vero. I placa geralmente de 10 0 a 10 -8 diluição (cada um sendo uma diluição de 10 vezes) a partir de 2 x 2 conjuntos de diluição separadas. Titulação do vírus é realizada em placas de 12 poços estéreis. </li></ol> 2. Infecção do mouse <ol><li> Injectar cada rato com 0,1 ml de anestésico cocktail/20 peso corporal do rato g (cetamina, 60 mg / kg de xilazina + 5 mg / kg, que é diluído em HBSS). Este coquetel é usado porque ele é um dos mais seguros meios de anestesia quando doses adequadas são utilizados e os efeitos da droga são muito curta. </li><li> Quando os ratos são anestesiados arranhar a córnea do olho direito, com uma agulha de calibre 30, utilizando um microscópio de dissecação para assegurar que a córnea não é perfurada. </li><li> Cada rato received uma injecção intraperitoneal de 1 ml de soro humano (Sigma, Temecula, Califórnia; reactividade anti-HSV com uma dose efectiva para 50% de neutralização viral de 1:800), a fim de proteger as córneas de danos durante a infecção primária. </li><li> Número os ratos com clipes ou qualquer um dos ouvidos pela orelha soco. </li><li> Depois de todos os ratinhos foram contados, usando um pipetador de 20 ul, que infectam cada olho com 10 6 PFU (5 ul). Nós infectar apenas um olho e normalmente o olho direito. Nós também colocar 5 ul de HBSS para o outro olho para mantê-lo húmido enquanto eles são anestesiados. 5 ul é suficiente para manter a hidratação dos olhos uma vez que os procedimentos são realizados em menos de 10 min, e os animais são doseados com anestésico em conformidade. A infecção é confirmada por raspagem ratinhos 3 dias pós-infecção com um aplicador de algodão estéril que foi hidratado em 1 ml de meio de Vero. Em seguida, 100 ul é adicionada a células Vero cultivadas em placas de 48 poços. Estas placas estão monitorando diariamente para efeitos citopáticos<html> (ECP). </li></ol> 3. Reativação do Ratos de Latência <ol><li> Os ratos são anestesiados pelo menos 5 semanas após a infecção primária. Deve notar-se que nos ratos reactivadas até um ano após a infecção primária e não observaram diferenças significativas nas respostas. </li><li> Uma vez anestesiados são colocados TM20 transiluminador cromatografia, Vu, que emite radiação UV-B a um comprimento de onda máximo de 302 nm de tal forma que apenas um único olho é exposto à luz UV-B. Cada rato é exposto a 250 cm de luz mJ de UV-B 2. </li><li> A reactivação é determinada por raspagem olhos com aplicador de algodão estéril, que é primeiro colocada em 1 ml de meio de Vero no dia 0 (antes da exposição ao UV-B para controlar shedders espontâneas) e, em seguida, em 1-7 dias pós-irradiação UV-B. O material de mecha é avaliada como descrito em 2.5). Para aqueles que têm zaragatoas vírus infeccioso a quantidade de vírus é tituladas por um ensaio de placas padrão utilizando placas de 12 poços. </li></ol>ove_title &quot;&gt; Avaliação 4. Clínica <ol><li> Os ratinhos são avaliados para a doença ocular clínico por um observador cego, utilizando um microscópio binocular de dissecação. </li><li> Opacidade da córnea é classificado numa escala de 0 a 4, onde 0 indica estroma clara, 1 indica a opacificação do estroma ligeira, 2 indica opacidade moderada com características discerníveis íris, 3 indica a opacidade densa, com perda de detalhe definido íris excepto margens da pupila, e 4 indica opacidade total com nenhuma visão posterior. </li><li> A neovascularização é classificado numa escala de 1-8, dividindo a córnea em quatro quadrantes iguais e determinar a extensão da vascularização em cada um destes quadrantes. </li><li> Blefarite é medida da seguinte forma: 0, sem lesões; 1, pálpebra mínimo inchaço; 2, descarga ocular moderada inchaço e mal-humorado, 3, inchaço grave, perda de cabelo moderada periocular, e lesões de pele, e 4, inchaço grave com os olhos fechados para crostas, perda de cabelo grave periocular, e lesões de pele. </li><li> Evidência de encefalite inclusãoded corcunda, cabelo babados e óbvias anormalidades neurológicas. Os ratos são sacrificados quando eles exibem sinais significativos de encefalite. </li></ol> 5. Resultados representativos O modelo de repetição, que foi descrito acima, foi publicada pela primeira vez por Shimeld, et al. 1-3. Eles testaram e nosso laboratório tem vindo a utilizar uma versão modificada do modelo de publicar muitos manuscritos sobre os 4-15 anos. O modelo foi utilizado para definir o papel que a citoquina interferon γ-peças na doença recorrente por HSV-1 10. Como mostrado na Figura 3, os ratos que faltam IFNy exibida pior doença da córnea do que ratinhos de tipo selvagem 14. Também foi usado com sucesso para definir o valor terapêutico da vacina diferente várias construções 6,10,11. Note-se que, num caso, a vacina testada funcionou bem profilacticamente, mas não provou ser terapeuticamente eficaz 6. No entanto,quando uma vacina de replicação incompetente-viral foi testado, não só foi eficaz profilacticamente, mas também foi muito eficaz terapeuticamente 10,11, ver a Figura 5 na referência 10. Mais recentemente temos usado este modelo para determinar se as diferenças de gênero foram detectáveis ​​em ratos submetidos a HSK recorrente. Como a Figura 1 mostra, camundongos machos C57BL / 6 exibir opacidade da córnea significativamente menos do que os do sexo feminino C57BL / 6 ratos. Da mesma forma, quando a neovascularização da córnea, foi avaliado, ratos macho demonstraram significativamente menos o crescimento dos vasos de novo na córnea do que ratinhos fêmea (Figura 2). No momento, estamos testando se este fenótipo é cepa específica através da realização de análise semelhante em outras linhagens de camundongos. Nós também irá determinar se a diferença é devida à falta de testosterona ou a presença de estrogénios. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig1.jpg" /> Figura 1. Doença de córnea em C57BL masculino e feminino / 6 linhagens de camundongos após UV-B reativação induzida. Ratinhos com infecção latente foram induzidos para reactivar com irradiação UV-B e os ratinhos foram monitorizados quanto a opacidade da córnea durante 35 dias. O número de ratos utilizados nestes estudos foram os seguintes: os machos, n = 15; fêmeas, n = 15. Os resultados indicam a média ± SEM. * Não foi significativamente maior doença induzida por vírus em ratinhos fêmea C57BL / 6 para os dias 14-35 (P = 0,001-0,01). <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig2.jpg" /> Figura 2. Doença de córnea em C57BL masculino e feminino / 6 linhagens de camundongos após UV-B reativação induzida. Ratinhos com infecção latente foram induzidos para reactivar com irradiação UV-B e os ratinhos foram monitorizados quanto a neovascularização da córnea durante 35 dias. O número de ratos utilizados nestes estudos foram os seguintes: os machos, n= 15; fêmeas, n = 15. Os resultados indicam a média ± SEM. * Não foi significativamente maior doença induzida por vírus em ratinhos fêmea C57BL / 6 para os dias 14-28 (P = 0,001-0,01).

<ol><li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+model+of+recurrent+herpetic+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice.</a> Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).</li>
<li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactivation+of+latent+infection+and+induction+of+recurrent+herpetic+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice.</a> J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).</li>
<li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+immunization+protects+the+mouse+eye+from+damage+after+herpes+simplex+virus+infection+by+limiting+spread+of+virus+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system.</a> J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).</li>
<li>Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+murine+model+of+recurrent+herpes+simplex+viral+keratitis+induced+by+ultraviolet+B+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).</li>
<li>Keadle, T. L., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-10+ameliorates+corneal+disease+in+a+mouse+model+of+recurrent+herpetic+keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Path%22%5BJournal%5D)">IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis.</a> Microbial Path. 38, 13-21 (2005).</li>
<li>Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+a+recombinant+glycoprotein+D+subunit+vaccine+on+the+development+of+primary+and+recurrent+ocular+infection+with+herpes+simplex+virus+type+1+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inf.+Dis%22%5BJournal%5D)">Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice.</a> J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).</li>
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<li>Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+and+CD8%2B+cells+are+key+participants+in+the+development+of+recurrent+herpetic+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Path%22%5BJournal%5D)">CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice.</a> Microbial Path. 32, 255-262 (2002).</li>
<li>Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+immunization+with+a+virion+host+shutoff-defective%2C+replication-incompetent+herpes+simplex+virus+type+1+strain+limits+recurrent+herpetic+ocular+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection.</a> J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).</li>
<li>Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+vaccination+with+vhs%28-%29+herpes+simplex+virus+reduces+the+severity+of+recurrent+herpetic+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice.</a> J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).</li>
<li>Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+aminoguanidine+on+primary+and+recurrent+ocular+herpes+simplex+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection.</a> Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).</li>
<li>Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL3+protects+mice+from+corneal+pathology+during+recurrent+HSV-1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Biosci%22%5BJournal%5D)">CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection.</a> Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).</li>
<li>Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon+gamma+is+not+required+for+recurrent+herpetic+stromal+keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis.</a> Virology. 380, 46-51 (2008).</li>
<li>Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+Interferon-gamma+by+an+adenovirus+vector+blocks+herpes+simplex+virus+Type+1+reactivation+in+vitro+and+in+vivo+independent+of+RNase+L+and+double-stranded+RNA-dependent+protein+kinase+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways.</a> J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O modelo de repetição de ceratite herpética estromal (HSK) aqui descrito permite ao investigador para estudar HSK humano num modelo que é mais consistente com o que é observado durante a doença humana. Assim, as intensidades do modelo são a doença que ocorre no contexto de um sistema imunitário que tem já por estimulado durante a doença primária. Uma vez que estes ratos já têm uma resposta imune contra HSV-1, os factores que reativam resposta imunitária que provavelmente diferentes daqueles que originalmente gerou. Port...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Soro humano</td><td>Sigma</td><td>S7023</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamina</td><td>Cellgro</td><td>25-005-C1</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Invitrogen</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Sorvall</td><td>Legend RT</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Beckman</td><td>52-21</td><td></td></tr><tr><td>Transiluminador</td><td>UVP</td><td>95-0452-02</td><td></td></tr><tr><td>Sonicador</td><td>Branson</td><td>Sonifier 450</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Oak Ridge</td><td>Nalgene</td><td>Z 720410</td><td></td></tr><tr><td>Frascos - 7150</td><td>Corning</td><td>430823</td><td></td></tr><tr><td>Placas - 12 poços</td><td>Corning</td><td>CLS 3513</td><td></td></tr><tr><td>Placas - 48 poços</td><td>Corning</td><td>CLS 3548</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos estéreis - 30 ml</td><td>Corning</td><td>CLS 430828</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores estéreis com ponta de algodão</td><td>Fisher</td><td>23-400-125</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas 30G</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas 25G</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 10 ml</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 10 ml</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr></tbody></table>

ceratite herpética recorrente estroma em camundongos, um modelo para estudar hsk humanos

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

Doença ocular herpética, denominado ceratite herpética estromal (HSK), é uma infecção potencialmente ofuscante da córnea, que resulta em mais de 300.000 por ano visitas clínicas para o tratamento. Entre 1 e 2 por cento dos pacientes com doença clínica vai ocorrer perda de visão da córnea infectada. A grande maioria destes casos é o resultado da reactivação de uma infecção latente pelo vírus herpes simplex tipo I, vírus e não devido a doença aguda. Curiosamente, a infecção aguda é o modelo mais usado para estudar essa doença. No entanto, considerou-se que um modelo recorrente de HSK seria mais reflexivo do que ocorre durante a doença clínica. Os modelos animais recorrentes para HSK ter empregado dois coelhos e ratos. A vantagem é que os coelhos que experimentam a reactivação da latência na ausência de qualquer estímulo conhecido. Dito isto, torna-se difícil explorar o papel que muitos factores imunológicos desempenham na HSK recorrente, porque o modelo de coelho não tem o immunrecursos genéticos e fisiológicos que o mouse possui. Optamos por utilizar o modelo de mouse para HSK recorrente porque tem a vantagem de haver muitos recursos disponíveis e também sabemos quando reativação ocorrerá porque a reativação é induzida pela exposição à luz UV-B. Até agora, este modelo tem permitido os laboratórios de usá-lo para definir vários fatores imunológicos que são importantes para esta doença. Também permitiu-nos testar a terapêutica e a eficácia da vacina.

A maioria dos estudos de doença herpética corneal utilizar um modelo de infecção primária. No entanto, a infecção primária por HSV-1 normalmente não conduzem à doença humana. Aqui nós descrevemos um modelo recorrente de doenças da córnea herpética, que mais imita a doença humana.

Ceratite herpética recorrente Estroma em camundongos, um modelo para estudar HSK Humanos

A doença ocular herpética, denominada ceratite estromal herpética (CEH), é uma infecção da córnea potencialmente cegante que resulta em mais de 300.000 casos clínicos...

O objetivo geral deste procedimento é estudar a infecção recorrente pelo vírus da herpes simples ou HSV. Isso é realizado primeiramente infectando camundongos de forma que fiquem latente infectados, sem danos corneanos. Após o estabelecimento completo da latência, o próximo passo é reativar o vírus pela exposição à luz UVB; na etapa final, o filme lacrimal é coletado para a detecção da liberação viral e o camundongo é então observado por pelo menos cinco semanas para monitorar a doença.Por fim, o grau da doença que ocorre nos camundongos pode ser avaliado por meio da pontuação da ceratite estromal herpética. Esta é uma doença que afeta muitas pessoas no mundo inteiro. Essa doença em particular é uma das principais causas de cegueira infecciosa.Temos um modelo que utilizamos em camundongos para simular esta doença específica. Existem outros modelos que realmente podem imitar esta doença, mas consideramos que este é a melhor representação dessa doença em particular. Gostaria de dedicar alguns minutos hoje para apresentar as pessoas que você verá neste vídeo.Esta é Chloe, que vem trabalhando comigo nos últimos meses. Este é Nippo, um aluno de verão que está trabalhando no laboratório.

recurrent-herpetic-stromal-keratitis-mice-model-for-studying-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Neste artigo de vídeo que descreve o uso de um...

Ex Vivo modelo organotípico córnea de Agudos Herpes simplex vírus tipo epiteliais eu Infecção

Fonte: Zhang, J., et al. P. Análise da Sinalização Imune Inata na Evasão Viral da Produção de Citocinas. J. Vis. Exp. (2014)Este vídeo demonstra a administração intranasal de herpesvírus murino em camundongos para induzir uma resposta imune específica no pulmão. O tecido pulmonar é posteriormente processado para obter sobrenadantes contendo citocinas, destinados à avaliação subsequente das respostas imunes do hospedeiro.

Infecção Intranasal por Herpesvírus Murino em Camundongos para Avaliar as Respostas Imunes do Hospedeiro

Este vídeo demonstra um método para gerar um modelo de camundongo humanizado duplo com um sistema imunológico humano e células hepáticas. Envolve o transplante de células hepáticas humanas e células-tronco hematopoiéticas e progenitoras em um camundongo imunodeficiente transgênico por meio de injeção intraesplênica, levando ao enxerto de células hepáticas e ao desenvolvimento de células imunes humanas.

Desenvolvendo um modelo de camundongo humanizado com células hepáticas humanas e células imunológicas

Foi estabelecido um protocolo de hibridização fluorescente in situ para a detecção de um genoma do vírus de ADN persistente nas secções de tecido de modelos animais. Este protocolo permite estudar processo de infecção por codetection do genoma viral, os seus produtos de ARN, e proteínas virais ou celulares no interior das células individuais.

A detecção do genoma e Transcrições de um vírus DNA persistente em tecidos neuronais por fluorescentes Em situ Hibridização Combinado com Imunocoloração

A pele é um tecido-alvo do patógeno humano vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1). Para explorar a rota de invasão do HSV-1 no tecido, estabelecemos um modelo de infecção ex vivo de lâminas epidérmicas murinas que representam a camada mais externa da pele.

Ex Vivo Infecção de Murino Epiderme com vírus herpes simplex tipo 1

Este protocolo fornece um método para estabelecer ratos humanizados (hu-NSG) através da injeção de colestase de células estaminais hematopoiéticas em camundongos NSG neonatais condicionada por radiação. O mouse hu-NSG é suscetível à infecção pelo HIV e terapia anti-retroviral combinatória (carrinho) e serve como um modelo fisiopatológico apropriado para investigações de latência e a replicação do HIV.

Humanizado NOD/SCID/IL2rγnula (hu-NSG) Mouse modelo para estudos de latência e a replicação do HIV

Aqui estão três abordagens experimentais para estudar a dinâmica da infecção pelo HIV em camundongos humanizados. O primeiro permite o estudo de eventos de infecção crônica, enquanto os dois últimos permitem o estudo de eventos agudos após infecção primária ou reativação viral.

Infecção por HIV crônica, aguda e reativada em modelos de camundongos imunodeficientes humanizados

O modelo de inoculação do footpad é uma ferramenta valiosa para caracterizar respostas neuroinflamatórias invulgadas pelo viral in vivo. Em particular, fornece uma avaliação clara da cinética viral e processos imunopatológicos associados iniciados no sistema nervoso periférico.

Modelo de inoculação do footpad do mouse para estudar respostas neuroinflamatórias induzidas pelo viral

Descrevemos o uso de uma córnea suína para testar a eficácia antiviral de drogas experimentais.

Explante de tecido córnea porcina para estudar a eficácia do vírus Herpes Simplex-1

A hipersensibilidade de contato (CHS) é um modelo experimental de murina de dermatite de contato alérgico (ACD). O CHS baseia-se na sensibilização com hapten reativo pintando a pele raspada do peito e abdômen, com um subsequente desafio da pele do ouvido com um hapten diluído, causando uma reação de inchaço que é avaliada de várias maneiras.

Entrar em contato com a Hipersensibilidade como modelo murino de dermatite de contato alérgico

Este protocolo explicará como estabelecer um modelo murino de cicatrizes hipertróficas que aumenta a sinalização de mecanotransdução para simular cicatrizes semelhantes às humanas. Este método envolve o aumento da tensão mecânica em uma incisão de cicatrização em um camundongo e o uso de um dispositivo especializado para criar tecido cicatricial excessivo e reprodutível para análises histológicas e bioinformáticas detalhadas.

Um modelo de camundongo de cicatrizes hipertróficas semelhantes às humanas e impulsionadas por mecanotransdução

Aprenda a estudar ceratite herpética recorrente em camundongos usando reativação viral por luz UVB. Este modelo reproduz a doença humana causada pelo HSV e auxilia no desenvolvimento de terapias para cegueira infecciosa.