الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء عمليات حذف لجين واحد على نطاق الجينوم في بكتيريا streptococcus sanguine باستخدام تقنية PCR عالية الإنتاجية. يتم تحقيق ذلك أولاً من خلال الحصول على ثلاثة نواتج تضخيم عن طريق تضخيم PCR عالي الإنتاجية، بما في ذلك جين المقاومة للمضادات الحيوية، بالإضافة إلى تسلسلات DNA الموجودة في الاتجاهين العلوي والسفلي للجين المستهدف. وتتمثل الخطوة الثانية في الحصول على ناتج PCR تضخيم معاد التركيب خطي باستخدام نواتج تضخيم PCR الثلاثة كقوالب.
بعد ذلك، يتم تحضير خلايا s sanguine الكفؤة. والخطوة النهائية هي تحويل ناتج تضخيم PCR المؤتلف الخطي إلى خلايا s sanguineous كفؤة. وفي النهاية، يُستخدم تضخيم PCR للمستعمرة A وتسلسل DNA للتحقق من الطفرات الصحيحة.
تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الأخرى المستنفذة، مثل تعطيل الجينات باستخدام البلازميد الانتحاري، في قدرة هذه الطريقة على إنشاء طفرات حذف على نطاق الجينوم بالكامل مباشرة باستخدام الإنتاجية العالية. يمكن تصميم وتخليق بادئات PCR كما هو موضح في البروتوكول المكتوب باستخدام نصوص برمجية داخلية تعتمد على تسلسل جينوم streptococcus sanguineous SK 36. تم تصميم ثلاث مجموعات من البادئات لتضخيم تسلسل طوله 1 kb من المنطقة الواقعة upstream للجين المستهدف، والترميز المشفر لبروتين A PHA three gene ENC، وبروتين مقاومة الكان