L'objectif général de cette procédure est de réaliser des délétions génomiques de gènes uniques chez Streptococcus sanguinis par PCR à haut débit. Cela est accompli en obtenant d'abord trois amplicons par amplification PCR à haut débit, incluant le gène de résistance à l'antibiotique ainsi que les séquences d'ADN en amont et en aval du gène cible. La deuxième étape consiste à obtenir l'amplicon linéaire recombinant par PCR en utilisant les trois amplicons PCR comme matrices.
Ensuite, les cellules compétentes de s sanguine sont préparées. La dernière étape consiste à transformer l'amplicon PCR recombinant linéaire dans des cellules compétentes de s sanguineous. Finalement, une amplification PCR de colon A et un séquençage de l'ADN sont utilisés pour vérifier les mutants corrects.
L'avantage principal de cette technique par rapport aux autres méthodes épuisantes comme le knock-out par plasmide suicide est qu'elle permet de créer directement un mutant de délétion à l'échelle du génome en utilisant un criblage à haut débit. Des amorces PCR peuvent être conçues et synthétisées comme décrit dans le protocole écrit, à l'aide de scripts internes basés sur la séquence du génome de Streptococc