L'obiettivo generale di questa procedura è realizzare delezioni genomiche di singoli geni in Streptococcus sanguinis mediante PCR ad alta capacità. Questo viene ottenuto innanzitutto ottenendo tre ampliconi mediante amplificazione PCR ad alta capacità, inclusi il gene di resistenza all'antibiotico e le sequenze di DNA a monte e a valle del gene bersaglio. Il secondo passaggio consiste nell'ottenere l'amplicone lineare ricombinante mediante PCR, utilizzando i tre ampliconi PCR come stampi.
Successivamente, si preparano le cellule s sanguine competenti. L'ultimo passaggio consiste nel trasformare l'amplificone PCR ricombinante lineare in cellule s sanguineus competenti. Infine, un'amplificazione PCR del gene colon A e il sequenziamento del DNA vengono utilizzati per verificare la corretta ottenzione dei mutanti.
Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ad altri metodi esaustivi come l'inserimento suicida di plasmidi per l'eliminazione genica, è che questo metodo permette di generare direttamente mutanti con delezioni su scala genomica mediante tecnologie ad alto rendimento. I primer per PCR possono essere progettati e sintetizzati come descritto nel protocollo scritto, utiliz