Ogólnym celem niniejszej procedury jest przeprowadzenie genomowych delecji pojedynczych genów w szczepie streptococcus sanguine za pomocą wysokoprzepustowego PCR. Osiąga się to poprzez uzyskanie w pierwszej kolejności trzech amplikonów w drodze wysokoprzepustowej amplifikacji PCR, obejmujących gen oporności na antybiotyk oraz sekwencje DNA położone powyżej (upstream) i poniżej (downstream) genu docelowego. Drugim krokiem jest otrzymanie liniowego rekombinowanego amplikonu PCR z wykorzystaniem trzech amplikonów PCR jako matryc.
Następnie przygotowuje się kompetentne komórki s sanguine. Ostatnim krokiem jest transformacja liniowego rekombinowanego amplikonu PCR do kompetentnych komórek s sanguineous. Ostatecznie do weryfikacji poprawnych mutantów wykorzystuje się amplifikację PCR kolon A oraz sekwencjonowanie DNA.
Główną zaletą tej techniki w porównaniu z innymi wyczerpanymi metodami, takimi jak knockout z użyciem plazmidu samobójczego, jest możliwość bezpośredniego tworzenia mutantów z delecjami w całym genomie przy użyciu wysokoprzepustowości. Startery PCR można zaprojektować i zsyntetyzować zgodnie z opisem w protokole pisemnym, wykorzystując wewnętrzne skrypty oparte na sekwencji g