Общая цель данной процедуры заключается в осуществлении полногеномного делетирования одиночных генов у streptococcus sanguine с помощью высокопроизводительной ПЦР. Это достигается путем первоначального получения трех ампликонов посредством высокопроизводительной ПЦР-амплификации, включая ген устойчивости к антибиотикам, а также выше- и нижележащие последовательности ДНК целевого гена. На втором этапе получается линейный рекомбинантный ПЦР-ампликон, используя три ПЦР-ампликона в качестве матриц.
Затем подготавливают компетентные клетки s sanguine. Заключительным этапом является трансформация линейного рекомбинантного ПЦР-ампликона в компетентные клетки s sanguine. В итоге для проверки правильности мутаций используют ПЦР-амплификацию колоний и секвенирование ДНК.
Основным преимуществом данной методики перед другими исчерпанными методами, такими как нокаут с помощью суицидальных плазмид, является возможность создания делеционного мутанта в масштабе всего генома непосредственно с применением высокопроизводительного анализа. Праймеры для ПЦР могут быть сконструированы и синтезированы согласно описанному в письменном протоколе способу с использованием внутренних скриптов на основе последов