Bu prosedürün genel amacı, yüksek verimli PCR aracılığıyla streptococcus sanguine türünde genom genelinde tek gen delesyonları gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle antibiyotik direnç geni ile hedef genin yukarı akış ve aşağı akış DNA dizilerini içeren üç amplikonun yüksek verimli PCR amplifikasyonu ile elde edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, üç PCR amplikonunu kalıp olarak kullanarak lineer rekombinant PCR amplikonunun elde edilmesidir.
Ardından, yetkin s sanguine hücreleri hazırlanır. Son adım, lineer rekombinant PCR amplikonunun yetkin s sanguineous hücrelerine transforme edilmesidir. Nihayetinde, doğru mutantları doğrulamak için kolon A PCR amplifikasyonu ve DNA dizilemesi kullanılır.
Bu tekniğin, intihar plazmidi nakavt gibi tükenmiş diğer yöntemlere göre temel avantajı, yüksek verimli bir şekilde doğrudan genom genelinde delesyon mutantları oluşturabilmesidir. PCR primerleri, streptococcus sanguineous SK 36 genom dizisine dayalı kurum içi betikler kullanılarak, yazılı protokolde açıklandığı şekilde tasarlanabilir ve sentezlenebilir. Hedef genin bir kilobazlık yukarı akış dizisinin, A PHA üç gen ENC kodlamasının, kanamisin direnç proteininin ve hedef genin bir kilobazl