Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
General Laboratory Techniques

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

מבוא לקורא המיקרו-לוחיות
 
Click here for the English version

מבוא לקורא המיקרו-לוחיות

Overview

קורא המיקרו-לוח הוא מכשיר רב-מודולי המאפשר לבצע ולמדוד בו זמנית מגוון ניסויים. קוראי מיקרו-פלאט יכולים לבצע מדידות ספיגה, פלואורסצנטיות וluminescence. לוחות מולטיוול הם חלק בלתי נפרד מקורא המיקרו-לוח ומאפשרים לבצע ניסויים רבים בבת אחת. ללא קשר לסוג ההסתה, ניסויים על קורא הלוחות משתמשים בעקומה סטנדרטית כדי לקבוע את הערכים הניסיוניים. עקומה זו משתמשת בדגימות של ריכוז ידוע כדי ליצור קו של התאמה מיטבית או עקומה סטנדרטית. לאחר מכן, ערכים ניסיוניים משוערים לעקומה או מחושבים באמצעות המשוואה מהרגרסיה הליניארית. מלבד תקנים ודגימות לרוץ על צלחת multiwall, ריק יחד עם פקדים חיוביים ושליליים משמשים גם ב- assay כדי להבטיח שהוא עובד כראוי. קוראים מכפילים משמשים לכימות חלבונים, ביטוי גנים ותהליכים מטבוליים שונים כגון מינים חמצן תגובתי ושטף סידן.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

קורא המיקרו-לוח הוא מכשיר נפוץ המאפשר למדוד בו זמנית דגימות רבות, כאילו נערכים בו זמנית ניסויים זעירים רבים.

מנגנון זה משמש בשילוב עם לוחות multiwell, כמו צלחת 96 היטב.

ללא קשר לסוג הניסוי המנוהל עם קורא המיקרו-לוח, עקומות סטנדרטיות משמשות לעתים קרובות כדי לקבוע את הערך של דגימות ניסיוניות, כמו גם פקדים חיוביים ושליליים.

קוראי מיקרו-לוח מגיעים בצורות, גדלים ותפאורות שונים. לקוראי מיקרו-לוח רבים יש יכולות רב-מודליות המאפשרות לבצע בדיקות רבות ושונות. שיטות אלה כוללות את היכולת לבצע סוגים שונים של מדידות, כגון ספיגה, פלואורסצנטי ומדידות זוהרות.

לוחות Multiwell הם רכיבים אינטגרליים לקורא המיקרו-לוחות ומשמשים להחזקת הדגימות הנמדדות על ידי המכונה. לוחות אלה יכולים להיות בגדלים שונים, יש סוגים שונים של תחתיות בארות ומספרים שונים של בארות. סוג הצלחת המשמשת תלוי בבדיקה.

מגש הטעינה משמש כדי להביא את צלחת 96-well לתוך המכונה.

ממשק מחשב משמש בדרך כלל להפעלת קורא הלוחות ולשליטה בהגדרות ובפרמטרים שלו, כגון אורך הגל והמצב. תוכנת קורא הלוחות כוללת ממשק משתמש גרפי של הצלחת המאפשר לך לבחור אילו בארות נטענות בדוגמאות.

צינורות רב-ערוציים משמשים לעתים קרובות לטעינת לוחות רב-באריים. המאגרים מכילים את הפתרונות עבור הפיפטה הרב-ערוצית.

לעתים ניתן לטעון את וולס באמצעות פיפטה סטנדרטית בערוץ יחיד.

דוגמאות ותקנים נטענים בשכפול או משולש כדי לתת דין וחשבון על שגיאות ההצינורות. כאן אתה רואה צלחת טעונה משולשת.

העקום הסטנדרטי משתמש בדגימות עם ריכוזים ידועים, המניבים ערכי ספיגה שונים. נתונים אלה משמשים לאחר מכן ליצירת גרף שבו נוצרת שורה של התאמה מיטבית.

הריק משמש לקביעת מידת המדידה שלך שאינה רלוונטית מבחינה ניסיונית והיא נובעת מהמאגרים שבהם המדגם שלך מדולל או ריאגנטים שאליהם המדגם שלך חשוף. הערכים המתקבלים ממדידות אלה נקראים "הרקע". הריק אינו מכיל דוגמה כלשהי.

השליטה החיובית מציינת אם ההסתה עבדה כראוי או לא. זה נותן תוצאה טובה. הפקד השלילי הוא משתנה בקרה שבו לא צפויה מדידה/אפקט. זה לא צריך להניב שום תוצאה..

ברגע שהצלחת מוכנה, הגיע הזמן לטעון את הדגימות. כדי למנוע מדידת הדגימות הלא נכונות או טעינת הצלחת בצורה לא נכונה, חשוב לכוון את הצלחת כראוי במגש הטעינה. זכור לנקוט זהירות בעת טעינת דגימות במגש, כדי לא לכפות את המגש לתוך המכשיר או לתפוס את הגפיים בתוך המכשיר.

לאחר טעינת המגש, פרמטרים כגון המצב, אורך הגל וסדר הטעינה היטב מוגדרים בתוכנה לפני קריאת הצלחת.

לאחר הגדרת הפרמטרים, הלוח נקרא והקורא יוצר קריאה מתוך ערכים בתוך התוכנה.

לאחר קריאת הלוח, השתמש בערך הממוצע של הדגימות הריקות כדי להחסיר את הרקע מכל הדגימות כולל העקומה הסטנדרטית.

לאחר הקריאה, ערכי הריכוז הידועים של הסטנדרטים מתווים כנגד הערכים הנמדדים שלהם, ספיגה במקרה זה.

כאשר הערכים התווו, ניתן לחשב את קו ההתאמה הטובה ביותר באמצעות רגרסיה ליניארית. ניתן לבצע זאת בקלות באמצעות תוכנית גיליון אלקטרוני.

מקדם הקביעה, מדד סטטיסטי של מידת הערך של השורה מנבאת נקודות נתונים בפועל, צריך להיות בין 0.90-0.99, כאשר 0.99 נחשב לערך הטוב ביותר ומסמל כי הקו מתאים לנתונים בצורה מושלמת.

באמצעות קו ההתאמה הטובה ביותר, אנו יכולים לחשב את ערכי הריכוז של דגימות ניסיוניות או פקדים בכל באר על-ידי חיבור ערך הספיגה עבור Y ולאחר מכן פתרון המשוואה עבור X. ניתן להעריך ערכי ריכוז גם על-ידי ציור קו מערך הספיגה בציר Y לקו ההתאמה הטוב ביותר ולאחר מכן לציר X.

סוגים רבים של קוראי מיקרו-לוחית מודדים ספיגה, המוגדרת כיחס הלוגריתמי של אור הנופל על אובייקט לאור המועבר דרך אובייקט.

ברדפורד assay הוא דוגמה של ספיגה מבוסס מיקרופלסטיק קורא בדיקות, שבו דגימות חלבון מתווספים לצלחת עם ריאגנט "ברדפורד". תרכובת זו נקשרת לחלבונים במדגם, וגורמת לשינוי בספיגתה.

בבדיחות מבוססות פלואורסצנטיות, פלואורוכרום מופעל על ידי אורך גל מסוים של אור ובתורו גורם להתרגשות של הפלואורוכרום, הפולט אור באורך גל אחר.

בעת עבודה עם ריאגנטים רגישים לאור, הקפד לשמור אותם מכוסים כדי למנוע הלבנת תמונות והרס הניסוי.

בדיקות זוהרות פולטת אור באמצעות תגובה כימית ולעתים קרובות משתמשות בלוציפראז. לוציפראז מגיע ממספר מקורות כגון גחליליות. בתגובת לוציפראז, אור נפלט כאשר לוציפראז נתקל חמצן, ATP, ומגנזיום בסדרה של תגובות.

מבדים זוהרים יש יישומים רבים ושונים. דוגמה ליישום זה היא מדידת הייצור והזיהוי של מינים חמצן תגובתי בסרטן.

יישומים אחרים, המשתמשים בקוראי מיקרו-לוח, כוללים בדיקות תפוקה גבוהה באמצעות בארות 384 ו-1536. בבחינתים האלה, לוחיות רישוי נטענות על ידי רובוט. לא, לא סוג כזה של רובוט. רובוט ניתן לתכנות אשר הופך טיפול מדגם מדויק ביותר לאוטומטי.

הרגע צפית בהקדמה של ג'וב לקורא המיקרו-לוחיות. בסרטון זה, הראינו מהו קורא מיקרולטים(A), כיצד משתמשים בו(B), כיצד להפעיל מכשיר זה(C), כיצד לפרש נתוני קורא מיקרו-לוחות, ויישומים מסוימים באמצעות קורא מיקרו-לוחית(D). תודה שצפיתם.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter