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마이크로 플레이트 리더 소개

Overview

마이크로 플레이트 판독기는 다양한 실험을 동시에 수행하고 측정할 수 있는 다중 모달 기기입니다. 마이크로플레이트 판독기는 흡수, 형광 및 발광 측정을 할 수 있습니다. 멀티웰 플레이트는 마이크로 플레이트 판독기에게 필수적이며 많은 실험을 한 번에 수행할 수 있습니다. 분석 유형에 관계없이 플레이트 판독기의 실험은 표준 곡선을 사용하여 실험 값을 결정합니다. 이 곡선은 알려진 농도의 샘플을 사용하여 가장 적합한 곡선 또는 표준 곡선의 라인을 생성합니다. 실험값은 곡선으로 추정되거나 선형 회귀에서 방정식을 사용하여 계산됩니다. 다중벽 플레이트에서 실행되는 표준 및 샘플 외에도 양수 및 음수 컨트롤과 함께 공백이 분석에서 올바르게 작동하는지 확인하는 데 사용됩니다. 다중 플레이트 판독기는 단백질, 유전자 발현 및 반응성 산소 종 및 칼슘 플럭스와 같은 다양한 대사 과정을 정량화하는 데 사용됩니다.

Procedure

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마이크로 플레이트 판독기는 많은 샘플이 동시에 수행되는 것처럼 많은 샘플을 동시에 측정할 수 있는 널리 사용되는 계측기입니다.

이 장치는 96 웰 플레이트와 같은 멀티웰 플레이트와 함께 사용됩니다.

마이크로 플레이트 판독기와 함께 실행되는 실험 유형에 관계없이 표준 곡선은 종종 실험 샘플의 값뿐만 아니라 양수 및 음수 컨트롤을 결정하는 데 사용됩니다.

마이크로 플레이트 판독기는 다양한 모양, 크기 및 설정으로 제공됩니다. 많은 마이크로 플레이트 판독기는 여러 가지 다른 에세이를 수행할 수 있도록 멀티 모달 기능을 가지고 있습니다. 이러한 양식에는 흡수, 형광 및 발광 측정과 같은 다양한 유형의 측정을 수행하는 기능이 포함됩니다.

멀티웰 플레이트는 마이크로 플레이트 판독기에 필수적인 구성 요소이며 기계에서 측정되는 샘플을 보유하는 데 사용됩니다. 이 플레이트는 다른 크기일 수 있으며, 다른 유형의 우물과 다른 수의 우물을 가질 수 있습니다. 사용되는 플레이트의 유형은 분석에 따라 다릅니다.

로딩 트레이는 96웰 플레이트를 기계에 가져오는 데 사용됩니다.

컴퓨터 인터페이스는 일반적으로 플레이트 판독기를 작동하고 파장 및 모드와 같은 설정 및 매개 변수를 제어하는 데 사용됩니다. 플레이트 리더 소프트웨어에는 샘플로 로드되는 우물을 선택할 수 있는 플레이트의 그래픽 사용자 인터페이스가 있습니다.

멀티채널 파이펫은 멀티웰 플레이트를 로드하는 데 자주 사용됩니다. 저장소는 멀티채널 파이펫용 솔루션을 보유하고 있습니다.

우물은 때때로 표준 단일 채널 파이펫을 사용하여 로드할 수 있습니다.

샘플 및 표준은 모든 파이펫 팅 오류를 고려하여 중복 또는 삼중으로 로드됩니다. 여기서 는 삼중판에 적재된 접시가 보입니다.

표준 곡선은 알려진 농도가 있는 샘플을 사용하여 서로 다른 흡광도 값을 생성합니다. 그런 다음 이 데이터는 가장 적합한 줄이 생성되는 그래프를 만드는 데 사용됩니다.

공백은 실험적으로 관련이 없는 측정 범위를 결정하는 데 사용되며 시료가 희석되거나 시약이 노출되는 버퍼 때문입니다. 이러한 측정에서 얻은 값을 "배경"이라고 합니다. 공백에는 샘플이 포함되어 있지 않습니다.

양수 컨트롤은 분석이 제대로 작동하는지 여부를 나타냅니다. 그것은 좋은 결과를 제공합니다. 음의 제어는 측정/효과가 관찰되지 않는 제어 변수입니다. 그것은 어떤 결과를 산출해서는 안됩니다..

플레이트가 설정되면 샘플을 로드할 차례입니다. 잘못된 샘플을 측정하거나 플레이트를 잘못된 방식으로 적재하는 것을 방지하기 위해 적재 트레이에서 플레이트를 올바르게 방향을 지정하는 것이 중요합니다. 트레이에 샘플을 적재할 때 주의해야 트레이를 기기에 넣거나 기기 내부의 사지를 잡지 마십시오.

트레이가 로드되면 플레이트를 읽기 전에 모드, 파장 및 잘 로드 순서와 같은 매개 변수가 소프트웨어에 설정됩니다.

매개 변수를 설정하면 플레이트가 읽히고 판독기는 소프트웨어 내에서 값 읽기를 생성합니다.

플레이트를 읽으면 빈 샘플의 평균 값을 사용하여 표준 곡선을 포함한 모든 샘플의 배경을 뺍니다.

판독 후 표준에 대한 알려진 농도 값은 각각측정된 값, 흡광도에 대해 플롯됩니다.

값이 플롯된 경우 선형 회귀를 사용하여 가장 적합한 선을 계산할 수 있습니다. 스프레드시트 프로그램을 사용하여 쉽게 수행할 수 있습니다.

선이 실제 데이터 포인트를 얼마나 잘 예측하는지에 대한 통계적 척도인 결정 계수는 0.90-0.99 사이여야 하며 0.99가 최상의 값으로 간주되고 선이 데이터에 완벽하게 부합한다는 것을 의미합니다.

가장 적합한 라인을 사용하여, 우리는 Y에 대한 흡광도 값을 연결하고 X. 농도 값에 대한 방정식을 해결하여 각 우물의 실험 샘플 또는 컨트롤의 농도 값을 계산할 수 있습니다.

마이크로플레이트 판독기의 많은 유형은 흡수성을 측정하며, 이는 물체에 떨어지는 빛의 로그리스믹 비율로 물체를 통해 전달되는 빛으로 정의됩니다.

브래드포드 분석은 단백질 샘플이 "브래드포드" 시약으로 접시에 첨가되는 흡광도 기반 마이크로 플레이트 판독기 분석의 예입니다. 이 화합물은 샘플의 단백질에 결합하고 흡수도의 변화를 일으킵니다.

형광계 의 색소에서 형광은 특정 파장에 의해 활성화되고 차례로 다른 파장에서 빛을 방출하는 형광의 흥분을 일으킵니다.

빛에 민감한 시약으로 작업 할 때, 표백및 실험을 망치지 않도록 덮여 그들을 유지해야합니다.

발광 성 소는 화학 반응을 통해 빛을 방출하고 종종 루시파라제를 사용합니다. 루시파라제는 반딧불과 같은 여러 출처에서 나옵니다. 루시파라제 반응에서, 빛은 루시파라제가 일련의 반응에서 산소, ATP 및 마그네슘을 만날 때 방출됩니다.

발광 성 소는 많은 다른 응용 프로그램을 가지고있다. 이 응용 프로그램의 예는 암에서 반응성 산소 종의 생산 및 검출을 측정하는 것입니다.

마이크로 플레이트 판독기를 사용하는 다른 응용 분야에는 384-및 1536-wells를 사용하여 높은 처리량 어필이 포함됩니다. 이러한 에세이에서 플레이트는 로봇에 의해 로드됩니다. 아니, 로봇의 그런 종류. 매우 정밀한 샘플 처리를 자동화하는 프로그래밍 가능한 로봇입니다.

당신은 마이크로 플레이트 리더에 JoVE의 소개를 보았다. 이 비디오에서는 마이크로레이트 판독기(A), 사용 방법(B), 이 계측기 작동 방법(C), 마이크로플레이트 판독기 데이터 해석 방법 및 마이크로플레이트 판독기(D)를 사용하는 일부 응용 프로그램을 보여 주았습니다. 시청해 주셔서 감사합니다.

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