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분광 광도계 소개

Overview

분광계는 과학 연구에서 일상적으로 사용되는 기기입니다. 분광측법은 분광광계를 이용하여 시료를 통해 빛의 빔을 전달하여 화학 물질이 빛을 얼마나 흡수하는지를 정량적 측정한다. 이 비디오에서는 분광측계의 구성 요소 외에도 분광측기의 기본 개념을 흡기, 흡광도 및 맥주 램버트 법칙을 검토합니다. 이러한 개념은 자외선 및 가시 범위에서 빛을 흡수 할 수있는 용액에서 solute의 농도를 결정하는 방법에 대한 기초를 제공합니다. 또한, 원하는 파장에서 시료의 흡광도를 비우고 측정하는 방법에 대한 지침을 포함하여 분광계를 작동하는 방법에 대한 절차가 시연된다. 비디오는 또한 Aalyte 농도의 측정을 위한 표준 곡선을 만드는 방법을 다룹니다. 생물학적 연구에서 분광계의 여러 응용 분야는 세포 밀도 측정 및 화학 반응 비율의 측정과 같은 논의됩니다. 마지막으로, 마이크로볼륨 분광계는 단백질과 핵산의 품질과 양을 측정하는 데 장점이 뿐만 아니라 도입된다.

Procedure

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분광광계는 생물학적, 화학, 임상 및 환경 연구에서 유비쿼터스로 사용되는 기기입니다.

분광측법은 분광광계를 이용하여 시료를 통해 빛의 빔을 전달하여 화학 물질이 빛을 얼마나 흡수하는지를 정량적 측정한다.

검출된 빛의 강도를 측정함으로써, 이 방법은 시료에서 솔루트의 농도를 결정하는 데 사용될 수 있다.

시료를 향해 방출되는 빛의 광선은 광자 스트림으로 구성됩니다.

광자가 샘플에서 분자를 만날 때 분자는 그 중 일부를 흡수하여 빛의 광선에 있는 광자의 수를 줄이고 검출된 신호의 강도를 감소시킬 수 있습니다.

송신은 시료를 통과하는 빛의 분수이며 인시던트 라이트의 강도를 통해 샘플을 통과하는 빛의 강도로 정의됩니다. 흡광도는 전송의 역 logarithm이며 분광광계가 측정 할 수량입니다.

흡광도로부터, 샘플 용액의 농도는 샘플의 흡수성과 농도 사이에 선형 관계가 있음을 명시하는 맥주-램버트 법으로부터 결정될 수 있다. 맥주 -램버트 법에 따르면, 흡수력은 멸종 계수의 산물이며, 솔루트가 주어진 파장에서 빛을 얼마나 강하게 흡수하는지, 빛이 시료를 통과하는 길이, 또는 경로 길이 및 솔ute의 농도를 측정합니다. 종종 흡수량 측정을 하는 목표는 시료의 농도를 측정하는 것입니다.

각 분광광계에는 빛의 광원, 강렬한 직선 광선을 전송하는 렌즈 또는 초점 장치인 콜리마이터, 빛의 빔을 구성 요소 파장에 분리하는 단색으로마토르, 또는 슬릿이 포함되어 있습니다. 이 비디오에서 논의 된 분광계에 사용되는 빛의 파장이 자외선과 가시 범위에 있습니다. 분광계에는 일종의 샘플 홀더, 흡수되는 광자의 양을 감지하는 광전 검출기, 검출기의 출력을 표시하는 스크린이 포함되어 있습니다.

최신 분광광계는 컴퓨터와 직접 결합되어 실험 매개 변수를 제어하고 결과가 표시됩니다.

분광성 측정을 수행할 때, 함께 작업하는 생물학적 또는 화학 용액의 종류에 따라 장갑 착용과 같은 적절한 예방 조치를 취해야 합니다.

샘플의 UV 가시 스펙트럼을 측정하기 전에 기계를 켜고 램프와 전자 장치가 예열되도록 합니다.

동일한 솔루션의 공백을 준비하지만, aalyte없이, 동일한 pH와 유사한 이온 강도를 갖는; 셀 및 용매가 일부 빛을 분산시킬 수 있기 때문에 필요한 단계.

전통적인 분광계 샘플 홀더는 플라스틱 과 석영 큐벳을 보유하도록 설계되었습니다. 빈 용액을 큐벳에 파이펫으로 이동합니다.

어떤 지문을 닦고 큐벳의 바깥쪽에서 흘린 후, 샘플 홀더에 큐벳을 적절히 삽입하고 큐벳 구획에 문을 닫습니다.

열린 분광광계에서 방출되는 UV 방사선이 눈과 피부를 손상시킬 수 있기 때문에 문을 닫는 것을 잊지 마십시오.

염분이 흡수하는 빛의 최적 파장에 따라 달라집니다 샘플에서 전송되는 원하는 파장 또는 파장 범위를 설정합니다. 그런 다음 빈 값을 읽음으로써 계측기를 0으로 설정하여 샘플 버퍼에서 배경을 뺍니다.

수행 중인 분광 실험의 유형에 따라 시료 분석물의 농도가 결국 결정될 수 있는 샘플 측정 전에 표준 곡선을 생성해야 할 수도 있습니다.

시료가 적절한 온도에 도달하여 거품이 유입되지 않도록 부드럽게 혼합하도록 허용합니다. 샘플은 큐벳, 기기 내 및 판독값에 직접 추가할 수 있습니다.

시료의 흡광도 측정을 수행한 후 실험에 적합한 계산을 진행합니다. 예를 들어 농도 또는 효소 활성의 속도의 결정.

분광계는 많은 생물학적 연구 실험실에서 매일 사용됩니다.

분광계의 일반적인 적용 중 하나는 세포 밀도의 측정입니다. 세포 밀도 측정은 재조합 단백질의 유도를 위한 최적의 시간을 결정할 수 있는 박테리아를 위한 로그산술 성장 곡선을 생성하는 데 유용합니다.

분광계는 또한 화학 반응 비율을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 예에서, 흡광도는 시간이 지남에 따라 452 nm에서 반응 중간체의 실종에 의해 효소 반응을 모니터링하는 데 사용된다. 이 효소 단계의 속도는 데이터를 적절한 방정식에 맞게 사용하여 계산할 수 있습니다.

최근에는 미세 량 분광광계의 도입으로 샘플 홀더의 필요성이 없어졌습니다. 이러한 분광계는 표면 장력을 사용하여 샘플을 보유합니다.

마이크로 볼륨 스펙트로포미터는 단백질과 핵산을 포함한 생체 분자와 같은 제한된 부피의 고가의 샘플의 품질과 농도를 측정하는 데 최적입니다.

280 nm에서 단백질의 흡수는 트립토판, 티로신 및 페닐알라닌에서 발견되는 방향족 측 사슬의 함량뿐만 아니라 시스테인 시스테인 이설화결합의 존재에 달려 있습니다.

단백질 농도는 아미노산 조성에 기초한 280nm의 흡수성과 소멸 계수로부터 결정될 수 있다.

DNA와 RNA 둘 다 그들의 농도를 결정할 수 있는 260 nm에서 흡광도 최대가 있습니다. 핵산의 순도는 또한 특정 파장에서 흡광도 판독의 비율에서 평가될 수 있다.

당신은 방금 조브의 분광광계 소개를 보았습니다.

이 비디오에서는 분광광측개념 및 분광광계 구성요소를 포함한 몇 가지 기본 원칙을 검토했습니다. 우리는 또한 분광계의 단계적 작동에 의해 단계 설명하고 생물학 연구에서 그것의 사용을 토론했습니다. 시청해 주셔서 감사합니다.

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