זנים עמידים של סטפילוקוקוס Methicillin הוצעו כגורם חיוני בזיהומים והתפרצויות nosocomial 4-8. דרכים נפוצות להכרה בהתנגדות methicillin, כגון בדיקת דיסק דיפוזיה oxacillin אגר מסך, או microdilution מרק, להסתמך על תנאי תרבות מותאמים כדי לשפר את הביטוי של התנגדות. שינויים כוללים ניצול של oxacillin, דגירה על 30 או 35 מעלות צלזיוס ולא 37 מעלות צלזיוס, וההכללה של NaCl למדיום הגידול. יתר על כן, לזיהוי נכון של סוגים של טכניקות אלה, תקופת דגירה ארוכה של 24 שעות, במקום 16 עד 18 שעות נדרשת. טכניקות מהירות עם רמה (> 96%) מתאימה לרגישות לזיהוי של התנגדות methicillin כוללות טכניקות microdilution אוטומטיות כגון כרטיס יטק GPS-SA, מערכת Staph ATB המהירה, ומערכת לוח Microscan המהירה אשר מייצרות תוצאות לאחר 3-11 שעות 9-11. קריסטל M RSA מזהה מערכת היא שיטה מהירה המבוססת על הכרה בצמיחתו של ס ' aureus בנוכחות של 2% NaCl ו 4 מ"ג של oxacillin לליטר עם חיישן חמצן הקרינה רגיש. רגישויות טענו נעות בין% 91 עד 100 לאחר 4 שעות של דגירה 12-14. שיטות פנוטיפי אלה מוגבלות בדיוקים שלהם על ידי ההשפעה של זנים נפוצים שמבטאים התנגדות הטרוגנית. לכן, השיטות הטובים ביותר המקובלת להכרה בהתנגדות methicillin היא ההכלאה PCR או DNA של גן Meca 15. עם זאת טכניקה זו דורשת ה-DNA מטוהר והוא רגיש מאוד למוספים שונים (זיהומים), הכוללים 16 פסולת תא.
יתר על כן, שיטות אלה צריכים זמן רב לבצע. אסטרטגיות להכרה של מוצר גן Meca, 2a PBP החלבון, יכולה להיות מנוצלים כדי לקבוע התנגדות ועשויות להיות אמינה יותר בהשוואה לשיטות בדיקה רגילה 17.
S = "jove_content"> זה היה שהוצג קודם לכן, כי יכול להיות מנוצל bacteriophage 12600 כמו בדיקה לזיהוי זני סטפילוקוקוס, כולל אלה שיש methicillin התנגדות 1,2,18. בעבודה זו אנו מציעים שיטה חדשנית בהכרה הספציפית וזיהוי של MRSA, כגון הכרה בחיידקים יחד עם קונפורמציה של MRSA בזמן אמת. למטרה הספציפית הזה ס (PBP 2 א) היה בשימוש bacteriophage aureus עם ספקטרום רחב של מארחים (כולל זני MRSA) בשילוב עם נוגדן חד שבטי כנגד חלבון. PBP 2a הוא חלבון דופן תא ואת זה הוא הגורם של התנגדות לאנטיביוטיקה של MRSA. עם זאת נוגדן 2a PBP אינו ספציפי עבור ס aureus מאז כמה חיידקים אחרים יש חלבונים מחייבים אנטיביוטיקה עם דמיון רצף לPBP 2a 19,20. כתוצאה מכך בעבודה זו, ש ' היו בשימוש bacteriophage aureus ונוגדנים כנגד חלבון 2a PBP. כדי להיות מסוגל לפתח biosensor לספציפיקאלי לאתר ולזהות MRSA מכשיר עם פעולת שני שלבים נוצלה. הצעד הראשון בשימוש ס monolayer aureus bacteriophage כמו בדיקה חיישן, ואילו בשלב השני הועסק 2a נוגדנים ספציפיים PBP. לכן, צעד אחד יכיר ס חיידק סטפילוקוקוס, כאחד האחר יהיה רגיש לחלבון לאנטיביוטיקה המחייב. כאשר אותות שהתקבלו משני צעדים הם חיוביים, הוא מציין את הגילוי הספציפי של MRSA.
המטרה הכללית של הניסוי הבא היא להבדיל בין זנים של Staphylococcus aureus העמידים למתיצילין (MRSA) לבין זנים הרגישים למתיצילין (MSSA), באמצעות פאגים ליטיים של חיידקים אנטי-מודיפיקציוניים שנבחרו במיוחד. כאשר חיידקים נצמדים לזנבות הגמישים והארוכים של הפאג הליטי, המרחק בין התאים הצמודים לבין פני השטח של החיישן גדול יותר מעומק החדירה של הגל האקוסטי של ה-QC m. לפיכך, לא נוצר אות המעיד על אירוע הקישור.
החלפת הפאג השלם בספרואיד מביאה לפאג תפקודי לחלוטין בעל זנבות קצרים, הנקשרים לחיידקים בתוך עומק החדירה של הגל האקוסטי של ה-QC m, ובכך תורמים לשינויים בתדירות ובפיזור כאשר סטרואידים של פאג מונחים על גבי גביש A-Q-C-M-D ונחשפים לתמיסת חיידקים מעורבת; הם נקשרים הן לזני MRSA והן לזני MSSA של staphylococcus aureus, אך לא לחיידקים אחרים, ובכך מפרידים את ה-staphylococcus aureus מהחיידקים האחרים על פני השטח של הגביש. לבסוף, כאשר מתווספות חרוזיים הקשורים לנוגדן PPP two A ספציפי ל-Mr.RSA, נוצר אות בנוכחות זני Mr.RSA של staphylococcus aureus. היתרונות העיקריים של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כגון PCR הם ששיטה זו אינה דורשת מיצוי DNA ואינה רגישה למשתנים אמפיריים.
למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי סריקה וחיטוי של staphylococcus orus, ניתן להחיל אותה גם על חיידקים אחרים העמידים לאנטיביוטיקה. הדגמה חזותית