Ceppi meticillino-resistenti di Staphylococcus aureus sono stati suggeriti come fattore di infezioni essenziali e le epidemie nosocomiali 4-8. Modi comuni di riconoscimento di resistenza alla meticillina, come la diffusione oxacillina prova schermo agar disco, o brodo microdiluizione, affidano a condizioni di coltura su misura per migliorare l'espressione di resistenza. Alterazioni comprendono l'utilizzo di oxacillina, incubazione a 30 o 35 ° C invece di 37 ° C, e l'inclusione di NaCl al mezzo di crescita. Inoltre, per una corretta rilevazione da questi tipi di tecniche, un lungo periodo di incubazione di 24 ore anziché 16 a 18 ore è necessaria. Tecniche rapide con appropriato livello (> 96%) di sensibilità per l'identificazione di resistenza alla meticillina comprendono tecniche microdiluizione automatici come il Vitek GPS-SA card, il sistema Rapid ATB stafilococco, e il sistema pannello Rapid Microscan che producono risultati dopo 3-11 ore 9-11. The Crystal MID sistema RSA è un metodo rapido basato sul riconoscimento della crescita di S. aureus in presenza di 2% di NaCl e 4 mg di oxacillina per litro con un sensore di fluorescenza sensibili all'ossigeno. Sensibilità rivendicati variano tra il 91 e il 100% dopo 4 ore di incubazione di 12-14. Questi metodi fenotipici limita le precisioni dall'impatto di ceppi prevalenti che esprimono resistenza eterogenea. Pertanto, i metodi più ampiamente accettato per il riconoscimento della resistenza alla meticillina è PCR o ibridazione DNA del gene mecA 15. Tuttavia questa tecnica richiede DNA purificato ed è estremamente sensibile a vari additivi (impurità), che includono cellule detriti 16.
Inoltre, queste tecniche hanno bisogno di molto tempo per eseguire. Strategie per il riconoscimento del prodotto del gene mecA, proteina PBP 2a, potrebbero essere utilizzati per determinare la resistenza e possono essere più affidabile rispetto alle tecniche di prova standard 17.
di Staphylococcus aureus compresi quelli aventi resistenza alla meticillina 1,2,18. In questo lavoro abbiamo proposto una nuova tecnica nel riconoscimento specifico e la rilevazione di MRSA, come ad esempio il riconoscimento di batteri con conformazione di MRSA in tempo reale. Per questo scopo specifico di una S. batteriofago aureus con un ampio spettro di ospiti (tra cui i ceppi di MRSA) in combinazione con anticorpi monoclonali contro la proteina (PBP 2a) sono stati utilizzati. PBP 2a è una proteina della parete cellulare ed è la causa di antibiotico resistività di MRSA. Tuttavia PBP 2a anticorpo non è specifico per S. aureus da altri batteri sono proteine leganti antibiotici con similarità di sequenza di PBP 2a 19,20. Di conseguenza, in questo lavoro, S. aureus batteriofago e anticorpi contro proteine PBP 2a sono stati utilizzati. Per essere in grado di sviluppare un biosensore per specificamente rilevare e identificare MRSA un dispositivo con un due stadi è stato utilizzato. Il passo iniziale utilizzato un S. aureus batteriofago monostrato come sonda sensore, mentre la seconda fase impiega anticorpi specifici PBP 2a. Pertanto, passo uno riconosceranno S. aureus batteri, come l'altra saranno sensibili alla proteina antibiotico-binding. Quando i segnali ricevuti da due passi sono positivi, indica il rilevamento specifico di MRSA.
L'obiettivo generale del seguente esperimento è discriminare ceppi di staphylococcus aureus resistenti alla meticillina (MRSA) e ceppi sensibili alla meticillina (MSSA) mediante un batteriofago litico anti-modificato appositamente selezionato. Quando i batteri si legano alle lunghe code flessibili del fago litico, la distanza tra le cellule legate e la superficie del sensore risulta maggiore rispetto alla penetrazione dell'onda acustica del QC m. Di conseguenza, non viene generato alcun segnale dell'evento di legame.
Sostituendo il fago integro con lo sferoide si ottengono fagi completamente funzionali con code corte, che si legano ai batteri entro la profondità di penetrazione dell'onda acustica del cristallo QCM. Ciò contribuisce ai cambiamenti di frequenza e dissipazione quando i derivati steroidei del fago vengono depositati sul cristallo A-Q-C-M-D ed esposti a una sospensione batterica mista: essi si legano sia ai ceppi MRSA che MSSA di Staphylococcus aureus, ma non ad altri batteri, separando così Staphylococcus aureus dagli altri batteri sulla superficie del cristallo. Infine, quando vengono aggiunte le microsfere legate all'anticorpo specifico PPP2A per MRSA, si genera un se