黄色ブドウ球菌のメチシリン耐性株は、本質的な感染症や院内アウトブレイク4-8の要因として示唆されている。このようなディスク拡散オキサシリン寒天スクリーンテスト、または微量液体希釈としてメチシリン耐性の認識の一般的な方法は、耐性の発現量を高めるために合わせた培養条件に依存している。変化は、成長培地に30または35でオキサシリン、インキュベーションの活用°Cではなく37℃以上、およびNaClのインクルージョンが含まれています。さらに、これらの種類の技法が正しい検出のため、24時間の代わりに16〜18時間の長い潜伏期間が必要である。メチシリン耐性を同定するための感度の適切な(> 96%)レベルの急速な技術は、バイテックGPS-SAカード、ラピッドATB黄色ブドウ球菌システム、及び3-11時間後に結果を生成する高速マイクロスキャンパネルシステムのような自動化された微量希釈法を含む9-11。クリスタルMRSA IDシステムは、Sの成長の認識に基づいて迅速な方法である2%NaClおよび酸素感受性蛍光センサー付リットルあたりオキサシリン4mgの存在下での黄色ブドウ球菌 。 91から100パーセントの間で感度の範囲は、インキュベーション12-14の4時間後に主張した。これらの表現型の方法は、異種の抵抗を発現普及している菌株の影響によりその精度が制限されている。したがって、メチシリン耐性の認識のための最高の広く受け入れられている方法はmecAの遺伝子15のPCRまたはDNAハイブリダイゼーションである。しかしこの手法は、精製されたDNAを必要とし、細胞の破片16を含む様々な混和剤(不純物)に非常に敏感です。
さらに、これらの技術は実行するのに長い時間を必要とする。 mecAの遺伝子産物、蛋白質PBP 2aとの認識戦略は抵抗を決定するために利用することができ、標準試験法17に比べて信頼性があってもよい。
1,2,18を有するものを含む黄色ブドウ球菌株の認識プローブとして利用することができることが示された。本研究ではこのようなリアルタイムでMRSAのコンフォメーションと一緒に細菌の認識などのMRSAの特異的認識と検出における新規手法を提案した。この特定の目的のためのS.タンパク質に対するモノクローナル抗体と組み合わせたホストの広いスペクトル(MRSA株を含む)と黄色ブドウ球菌バクテリオファージは、(PBP 2a)が使用されている。 PBP 2aは、細胞壁タンパク質であり、それはMRSAの抗生物質抵抗性の原因である。しかしPBP 2aの抗体は、S.のために固有のものではありませんいくつかの他の細菌から黄色ブドウ球菌は、PBP 2A 19,20に配列類似性と抗生物質結合タンパク質を持っている。そこで本研究では、S. PBP 2aの蛋白質に対する黄色ブドウ球菌バクテリオファージおよび抗体が使用されている。納入仕様にバイオセンサーを開発することができるようにする的に二段階のアクションが利用されていると、デバイスを検出し、MRSAを識別します。最初のステップは、Sを使用センサプローブとして球菌バクテリオファージ単層、2番目のステップはPBP 2A特異的な抗体を用いている。したがって、人はS.を認識し、手順黄色ブドウ球菌の細菌は、他の一人としての抗生物質結合タンパク質に敏感になります。二つのステップから受信された信号が正である場合には、MRSAの特異的検出を示す。
本実験の総合的な目的は、特異的に選択された改変溶菌性バクテリオファージを用いて、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)株とメチシリン感受性黄色ブドウ球菌(MSSA)株を判別することである。細菌が溶菌性ファージの長く柔軟な尾部に付着すると、付着した細胞とセンサー表面との距離がQC mの音響波の浸透深さよりも大きくなる。そのため、結合イベントによる信号は生成されない。
無傷のファージをスフェロイドに置換すると、短い尾部を持つ完全に機能的なファージが得られます。これにより、QC-Mの音響波の浸透深さ内にある細菌と結合し、ファージスフェロイドがA-Q-C-M-D結晶上に堆積され、混合細菌懸濁液にさらされた際の周波数変化および散逸変化に寄与します。これらはstaphylococcus aureusのMRSA株とMSSA株の両方に結合しますが、他の細菌には結合しないため、結晶表面上でstaphylococcus aureusを他の細菌から分離させます。最終的に、MRSA特異的なPPP two A抗体結合ビーズを添加すると、staphylococcus aureusのMRSA株が存在する場合に信号が生成されます。PCRなどの既存の手法に対するこの技術の主な利点は、DNA抽出を必要とせず、エンピリックスの影響を受けないことです。
この手法は黄色ブドウ球菌(staphylococcus aureus)のスクリーニングや消毒に関する知見を提供しますが、他の薬剤耐性菌にも適用可能です。バイオセンサの作製には精密さ、正確さ、そして根気が求められるため、本手法を視覚的に提示することが重要です。まず、金コーティングされた石英片をArgonneで10分間プラズマエッチングして洗浄し、次いで滅菌キャビネット内でUV光を照射して6時間滅菌します。滅菌後、滅菌済みのシャーレ内で各石英片の金表面にファージ懸濁液を50 µL滴下し、加湿チャンバー内で室温にて一晩インキュベートします。翌朝、タイター測定用に残ったファージ懸濁液を除去し、その後、結合していないファージを取り除くため、結合したファージを持つ各石英片をPBSで5回洗浄します。
乾燥表面における固定化ファージの感染性を試験するには、まず黄色ブドウ球菌(staphylococcus aureus)の overnight 培養液を NZY eRate プレートに塗布し、懸濁液を乾燥させます。次に、ファージを固定化した金コーティングクオーツ片を、固定面を下にしてプレート上に配置します。37 °C で 12 時間後、感染性を示す溶菌環(zone of lysis)が観察されます。これにより、液体中における遊離ファージの溶菌活性を試験することができます。
まず、4本の300 mLサイドアームフラスコそれぞれに、10 mLのNZYと黄色ブドウ球菌(staph