황색 포도상 구균의 메티 실린 내성은 필수 감염과 원내 발생 4-8에 영향을 미치는 요인으로 제시되었다. 이러한 디스크를 확산 oxacillin 한천 스크린 테스트, 또는 국물 microdilution으로 메티 실린 저항의 인식의 일반적인 방법은, 저항의 표현을 향상시키기 위해 맞춤형 배양 조건에 의존한다. 변경은 oxacillin의 활용, ° C보다는 37 ° C 이상 30 35 배양 및 성장 매체의 NaCl의 포함이 (가) 있습니다. 또한, 기술의 이러한 유형으로 정확한 탐지를 위해, 24 시간의 긴 잠복기 대신에 16-18 시간의 필요합니다. 메티 실린 저항의 식별을위한 감도 적절한 (> 96 %) 수준의 빠른 기술은 3-11 시간 후 결과를 같은 VITEK GPS-SA 카드, 신속한 ATB 포도상 구균 시스템 및 신속한 Microscan은 패널 시스템으로 자동 microdilution 기술을 포함 9-11. 크리스탈 MRSA ID 시스템은 S.의 성장 인식에 따라 빠른 방법입니다 2 % 염화나트륨과 산소에 민감한 형광 센서 리터 당 oxacillin 4 MG의 존재 구균. 주장 감도는 배양 12-14 4 시간 후에 100-91 % 사이가 다양합니다. 이러한 표현형 방법은 서로 다른 저항을 표현하는 유행 균주의 영향으로 자신의 정확도에 제한됩니다. 따라서 메티 실린 저항의 인식을위한 가장 널리 사용되는 방법은 메카 유전자 15의 PCR 또는 DNA 혼성화입니다. 그러나이 기술은 정제 된 DNA가 필요하며 세포 파편 16 등 각종 혼화제 (불순물)에 매우 민감합니다.
또한, 이러한 기술을 수행하는 데 오랜 시간이 필요합니다. 메카 유전자 제품, 단백질 PBP 2a에의 인식 전략은 저항을 결정하기 위해 활용 될 수 있으며 표준 시험 방법 17에 비해 더 신뢰할 수 있습니다.
1,2,18을 갖는 포함 황색 포도상 구균의 변종에 대한 인식 조사로 활용 될 수 있음을 표시했다. 이 작품에서 우리는 실시간으로 MRSA의 형태와 함께 박테리아의 인식과 같은 MRSA의 특정 인식 및 탐지에있는 새로운 기술을 제안 하였다. 이 특정한 목적 S.에 대한 단백질에 대한 단클론 항체와 결합 된 호스트의 다양한 스펙트럼 (MRSA 균주 포함) 구균 살균은 (PBP 2a에) 사용되었습니다. PBP 2a에는 세포벽 단백질이며 MRSA의 항생제 저항의 원인입니다. 그러나 PBP 2a에 항체는 S.에 대한 구체적인 없습니다 다른 박테리아 이후 구균 PBP 2a에 19,20에 서열의 유사성과 항생제 결합 단백질이 있습니다. 따라서 본 연구에서는 S. PBP 2a에 단백질에 대한 구균 살균 및 항체가 사용되었습니다. specifi에 바이오 센서를 개발 할 수 있으려면,으로 두 단계 동작을 활용 한로 장치를 인식하고 MRSA를 식별합니다. 초기 단계는 S.를 사용 센서 프로브와 같은 구균 살균의 단층, 두 번째 단계는 PBP 2a에 특정 항체를 고용하면서. 따라서 하나 S를 인식 단계 구균 박테리아, 다른 하나 항생제 결합 단백질에 민감 할 것입니다. 두 단계에서 수신 신호가 긍정적 인 경우는 MRSA의 특정 감지를 나타냅니다.
다음 실험의 전반적인 목표는 특별히 선택된 항-변형 용해성 박테리오파지를 이용하여 메티실린 내성 황색포도상구균(MRSA)과 메티실린 감수성 황색포도상구균(MSSA) 균주를 구별하는 것입니다. 박테리아가 용해성 파지의 길고 유연한 꼬리에 부착되면, 부착된 세포와 센서 표면 사이의 거리가 QC m의 음파 침투 깊이보다 커집니다. 따라서 결합 이벤트에 의한 신호가 생성되지 않습니다.
온전한 파지를 스페로이드로 교체하면 꼬리가 짧은 완전 기능성 파지가 생성되며, 이는 QCM 음향 파동의 침투 깊이 내에서 박테리아와 결합하여, 파지 스페로이드가 AQCM-D 결정에 증착되고 혼합 박테리아 현탁액에 노출되었을 때 주파수 및 소산 변화에 기여하게 됩니다. 이들은 Staphylococcus aureus의 MRSA 및 MSSA 균주 모두와 결합하지만 다른 박테리아와는 결합하지 않으므로, 결정 표면에서 Staphylococcus aureus를 다른 박테리아와 분리합니다. 마지막으로, MRSA 특이적 PPP2A 항체 결합 비드를 추가하면 Staphylococcus aureus의 MRSA 균주가 존재할 때 신호가 생성됩니다. PCR과 같은 기존 방법 대비 이 기술의 주요 장점은 DNA 추출이 필요하지 않으며 효소의 영향에 민감하지 않다는 점입니다.
이 방법은 황색포도상구균(staphylococcus aureus)의 선별 및 소독에 대한 통찰을 제공할 수 있지만, 다른 항생제 내성 박테리아에도 적용할 수 있습니다. 바이오센서 제작에는 정밀함, 정확성 및 인내심이 필요하므로 이 방법에 대한 시각적 시연이 매우 중요합니다. 먼저 Argonne에서 10분 동안 플라즈마 식각을 통해 금 코팅된 쿼츠 조각을 세척하고, 멸균 캐비닛 내에서 UV 광선으로 6시간 동안 멸균합니다. 멸균 후, 멸균 페트리 접시에 담긴 각 조각의 금 표면에 50 µL의 파지 현탁액을 처리한 다음, 습윤 챔버에서 실온으로 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날 아침, 역가 측정을 위해 남은 파지 현탁액을 제거한 후, 결합되지 않은 파지를 제거하기 위해 PBS로 결합된 파지가 있는 각 쿼츠 조각을 5회 세척합니다.
건조 표면에서 고정화된 파지의 감염력을 테스트하려면, 먼저 Staphylococcus aureus의 밤샘 배양액을 NZY eRate 배지에 도말하고 현탁액을 건조시킵니다. 그 다음, 파지가 고정화된 금 코팅 쿼츠 조각을 플레이트 위에 뒤집어 놓습니다. 37 °C에서 12시