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Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans

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초파리 배아, 유충의 준비

Overview

Drosophila 멜라노가스터 배아와 애벌레는 포유류를 포함하여 그밖 유기체와 유사한 기계장치에 의해 빠르게 조작하고 발전하기 쉽습니다. 이러한 이유로, 많은 연구원은 행동생물학에 구역 수색하는 다양한 필드에 있는 질문에 대답하기 위하여 플라이 배아및 애벌레를 이용합니다. 그러나 실험 전에배아와 애벌레는 먼저 수집해야 합니다.

이 비디오는 먼저 "계란 누워 컵"이 한천 접시에 Drosophila 배아를 수집하는 데 사용되는 방법을 보여줍니다. 배아의 수확과 비반향은 그 때 기술될 것입니다. 다음으로, 비디오는 배아 단계를 따르는 세 가지 애벌레 단계 중 하나에서 Drosophila를 식별하고 조작하는 방법을 보여줍니다. 마지막으로, 태아와 유충이 생물학적 연구에서 사용되는 몇 가지 방법의 예가 제공됩니다.

Procedure

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Drosophila 멜라노가스터 배아와 애벌레는 조작하기 쉽고 그들의 발달은 포유동물을 포함하여 그밖 유기체에 존재하는 기계장치에 의해 인도됩니다. 배아와 애벌레를 수확하고 준비하는 법을 배우는 것은 행동에서 발달 생물학에 이르기까지 많은 실험 과정의 예비 단계입니다. 이 비디오는 Drosophila 배아와 유충을 수집하고 수확하기위한 표준 방법을 다룰 것입니다, 이 다목적 모델 유기체의 사용에 필수적인 절차.

Drosophila 태아의 연구 결과는 유전자가 난피테에 있는 그라데이션으로 표현되는 mRNA에서, 전방에서 후방 분할된 바디 계획을 형성하는 유전자에 개발을 통제하는 방식에 큰 통찰력을 제공했습니다. 동종 상자 유전자 같이 이 유전자의 몇몇은 이 곤충과 포유동물 사이에서 높게 보존됩니다.

Drosophila 배아의 푸짐한 성격은 가혹한 환경 및 화학제품에 노출을 견딜 수 있게 해주며, 이는 연구하기에 매우 실용적입니다.

수정 후 한 여성 비행은 하루에 최대 100 개의 배아를 놓을 수 있으며, 12-15 시간 후에 유충으로 부화됩니다.

Drosophila 배아를 조작하기 위하여는, 그(것)들은 첫째로 수집되어야 합니다.

배아는 종종 "계란 누워 컵"이라고 계란 누워 챔버에서 수집됩니다.

누워 컵을 조립하려면 먼저 구멍을 찌르거나 용기의 일부를 잘라 내어 다공성 재료로 덮어 환기를 허용합니다. 그런 다음 사과 또는 포도 주스 한천 접시를 얻고 효모 페이스트로 줄무늬를 만들고 중앙에 접시를 긁습니다. 효모 페이스트의 존재는 계란 누워를 유도합니다.

신속하게 계란 누워 챔버에 파리를 추가하고, 접시가 바닥에 있도록 챔버를 반전하고, 배양 할 수 있습니다. 원하는 잠복기 후 계란 챔버를 반전하고 벤치 상단에 몇 번 강타. 파리는 바닥으로 떨어지고 잠시 방향 감각을 잃었다. 오래된 한천 판을 효모 페이스트로 겹쳐진 신선한 접시로 빠르게 교체합니다. 가장 잘 숙성된 배아를 획득하려면 1-3시간마다 플레이트를 변경합니다.

플레이트는 특히 스크래치와 효모 근처에 수백 개의 배아가 있습니다.

각 성별의 20 파리는 시간당 100-200 개의 배아를 생성해야합니다. 이제 배아를 수확할 수 있습니다.

배아 수확에 필요한 도구는 스트레이너 나 체로 크기와 복잡성, 페인트 브러시 및 증류수가 크게 다를 수 있습니다.

첫째, 접시에 증류수로 침지하여 배아를 풀어 페인트 브러시로 표면을 부드럽게 닦습니다. 다음으로 혼합물을 체에 부어 액체를 걸게 합니다. 배아를 물로 헹구는 다.

헹구는 것은 종종 비반향이 뒤따릅니다 - 배아의 단단한 외부 막제거, 또는 초리온.

불반향은 초리오닉 칼집에서 배아의 해부를 통해 수동으로 수행 할 수 있습니다. 대안적으로, 태아는 50% 표백제로 놓일 수 있습니다. 등부속물의 실종에 의해 언급된 바와 같이, 초리온이 녹는 데는 2-10분이 걸립니다. 증류수로 철저히 헹구어 벌거벗은 배아가 표백제에 의해 손상되지 않았는지 확인합니다. 불반향은 미세 주입 및 살아있는 세포 화상 진찰 같이 기술에 전제 조건입니다.

이제 배아 생물학, 수집 및 수확의 감각을 얻었으니, 드로소필라 수명 주기의 다음 단계로 넘어가봅시다: 애벌레.

드로소필라 애벌레에는 세 가지 "인스타" 또는 몰팅 스테이지가 있습니다. 첫 번째 인스타는 하루, 두 번째 다른 날, 세 번째 이틀 더 지속됩니다. 첫 번째와 두 번째 인스타 애벌레는 십자가를 설정 한 후 1-3 일 병병의 음식에서 발견된다. 4일째되는 날, 세 번째 인스타 애벌레가 이동하거나 컨테이너의 측면을 "방황"하여 궁극적으로 푸파라고 불리는 고치를 형성합니다.

애벌레는 종종 그들의 상상 디스크 때문에 실험에 사용 됩니다. 상상 디스크는 성인 비행의 전체 부분이 될 것으로 알려져 부분적으로 개발 된 기관입니다. 예를 들어, 상상의 눈 디스크는 성인의 눈이 되고, 안테나 디스크는 안테나가 되고, 상상날개 디스크는 날개가 됩니다. 상상 디스크의 연구는 패턴 형성에 있는 homeobox 유전자의 역할과 같은 Drosophila에 있는 중요한 발견으로 이끌어 냈습니다.

유충 수집은 특수 하우징으로 파리의 이송을 요구하지 않기 때문에 배아 수집보다 간단합니다.

개별 유충은 핀셋 또는 주걱으로 제거 될 수 있습니다. 많은 수의 초기 단계 유충을 수집할 때 자당 용액을 사용하여 대체 수집 방법을 사용할 수 있으며, 이는 애벌레보다 밀도가 높고 부유하게 됩니다.

유리병에 자당용액을 넣고, 유리병은 유충을 위에 부표로 부표로 넣습니다. 회전에 유리병을 배치하여 음식을 빼냅니다. 그런 다음 브러시 또는 파이펫으로 애벌레를 제거하고 실험을 위해 수확하십시오.

이제 배아와 애벌레에 대한 수집 및 수확 기술을 다루었으니 이제 실험에 적용하는 방법을 살펴보겠습니다.

그들은 모바일 이기 때문에, Drosophila 애벌레 행동 실험에 사용할 수 있습니다.

여기서는 특정 조건에서 Drosophila 운동 동작을 평가하는 데 사용되는 "크롤링 분석"이 표시됩니다. 크롤링 분석은 운동 기능에 대한 약물의 효과를 관찰하기 위해 유충이 이동하는 거리를 측정합니다. 수집된 애벌레는 운동성을 방해할 것으로 예상되는 마약성 자당 용액에 침지됩니다.

미세 주입은 원형 DNA 플라스미드의 형태로 맞춤형 유전 물질을 삽입하여 트랜스제닉 돌연변이제로 알려진 유전자 변형 과일 파리를 만드는 절차입니다.

이 배아는 화학 물질이 손상되지 않도록 양면 테이프에 물리적으로 굴려서 반향을 불러 일으켰습니다. 배아는 그 때 GFP 같이 형광 기자 단백질과 융합한 tubulin 같이 단백질을 인코딩하는 플라스미드로 주입될 수 있습니다. 실험은 그 때 확립된 형질 전환선에서 미토시스 같이 세포 프로세스를 구상하기 위하여 수행될 수 있습니다.

배아는 시상 혼성화에서 형광을 통해 전사체의 존재를 시각화하는 데 사용할 수 있습니다.

이 실험에서, 전체 배아는 형광 현미경 검사를 통해 원하는 mRNA 전사체의 존재를 위해 관찰된다. 배아는 비반향하는 양면 용액을 사용하여 고정되어, 따라서 염색을 위한 태아를 준비합니다. 벌거 벗은 배아는 바닥 층에 있습니다. 면역형염색 후, 원하는 단백질의 존재는 형광 현미경 검사를 사용하여 볼 수 있다.

당신은 조브의 배아와 애벌레 수확 및 준비 비디오를 보았다. 우리는 배아와 애벌레의 수집, 수확 및 준비및 초기 단계 유기체에 적용되는 몇몇 중요한 응용을 검토했습니다. 시청해 주셔서 감사합니다!

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