효모 유지

세포 주기 조절의 중요한 발견, 텔로머라제 활동, 그리고 Saccharomyces cerevisiae에서autophagy, 이 효모 종 연구를 위한 귀중한 모형 유기체는 입증되었습니다. 효모는 성장하기 쉽고 효모 플라스미드와 균주는 시판됩니다. 효모를 배양하기위한 상대적으로 저렴한 요구 사항에도 불구하고,이 유기체의 유지 보수는 성공적인 실험에 매우 중요합니다. 이 비디오는 효모 세포 배양을 성장하고 실험실에서 S. cerevisiae 균주를 유지하는 방법에 대한 내부 살펴보기를 제공합니다.

생물학에서, 성장 곡선은 시간의 기간 동안 세포 인구의 변화를 나타냅니다. 효모에서, 성장 곡선은 x 축에 대한 y축 및 시간에서 600 nm에서 세포 배양의 광학 밀도 또는 "OD"를 플로팅하여 생성된다. 광학 밀도 또는 "흡광도"는 효모 세포 현탁액을 통과하는 강도에 들어가는 빛의 강도의 로그산염 비이다. 특정 파장의 OD는 분광광계를 사용하여 측정됩니다.

효모로 작업할 때 효모 균주의 성장 곡선은 다른 시간 간격으로 OD 측정을 통해 생성되어야 합니다. 효모 성장 곡선은 지연, 로그산학 및 고정 단계의 세 가지 주요 단계로 나뉩니다. 지연 단계 동안 세포는 환경에 적응하고 크기가 증가하지만 분할되지 는 않습니다. 로그 단계에서 세포는 적극적으로 분할되어 셀 이중으로 이어집니다. 사용 가능한 영양소가 고갈되면 효모 세포는 세포 분열이 느려지고 세포 인구가 일정하게 유지되는 고정 된 상태로 들어갑니다.

성장 곡선을 사용하여, 변형의 두 배 시간은 다음과 같은 방정식으로 계산 할 수있다: OD1과 OD2는 광학 밀도 측정을 나타내고, T1과 T2는 측정 사이의 시간입니다. 두 배로 되는 시간은 세포 수가 두 배가 되는 세포 집단에 필요한 시간으로 정의된다. 예를 들어, 여기에 표시된 값 0.2와 0.5 사이의 두 로그 단계 OD 값 간에 계산합니다. 야생 형 효모는 약 90 분의 두 배의 시간 값을 제공해야합니다.

두 배로 시간을 아는 것은 하루 종일 그에 따라 실험을 계획 할 수 있기 때문에 도움이됩니다.

이제 우리는 효모 성장 곡선의 견과류와 볼트를 덮어, 실험실에 진행하고 효모 세포를 성장시키기위한 준비에 약간의 손을 할 수 있습니다. 풍부한 성장 매체의 주요 구성 요소인 일명 효모 식품은 효모 추출물, 펩톤 및 설탕 공급원입니다. 효모 추출물은 세포벽을 제외한 효모 세포 함량을 함유하고 있으며, 성장에 필요한 아미노산, 비타민, 탄수화물 및 기타 영양소를 제공합니다. 펩톤은 동물성 고기 나 우유에서 파생되며 효모 미디어에서 아미노산의 주요 공급원입니다. 설탕 소스, 전형적으로 포도 당, 그것은 성장 하는 세포에 에너지를 제공 으로 추가 됩니다.

효모 추출물과 펩톤을 물에 용해한 후, 오토클레이브를 사용하여 혼합물을 살균한다. 효모 미디어 플레이트를 만들려면 액체 미디어에 한고를 추가하고 혼합물을 접시에 부어 실온에서 고화할 수 있습니다. 이 플레이트는 효모 식민지를 성장시키는 균주를 줄무늬할 때 사용할 수 있습니다.

이제 모든 미디어가 준비되었으므로 이 동물의 문화를 처음부터 어떻게 성장시킬 수 있을까요? 무엇보다도 모든 기기, 솔루션 및 미디어가 멸균되었는지 확인하십시오.

다음으로, 효모 세포를 줄무늬플레이트를 얻습니다. 아니 그런 종류의 줄무늬! 줄무늬는 액체 효모 배양을 멸균 기기를 사용하여 한천 판에 퍼지는 과정입니다. 효모 세포의 순수한 유전 적 집단을 얻기 위해 선택할 수있는 단일 효모 세포에서 파생 되는 "줄무늬"개별 식민지 주위에 형성됩니다. 플레이트가 줄무늬가 되면 플레이트를 반전시키고 2~3일 동안 30°C 인큐베이터에 놓습니다. 이것은 효모 성장을위한 최적의 온도입니다.

일단 식민지가 형성되면, 성장 매체의 작은 양에서 효모 세포를 접종. 여기서 접종을 하는 것은 하나의 식민지를 따서 간단히 혼합하여 미디어에 도입하는 것을 의미합니다. 30°C 셰이커 또는 회전기에서 48시간 동안 배양한다.

세포의 더 큰 배양을 성장하려면 먼저 분광계를 사용하여 2 일 된 효모 배양의 OD600을 확인하십시오. 시작 OD가 약 0.1-0.2되도록 적절한 희석을 합니다. 세포를 희석한 후 플라스크를 30°C 셰이커에 놓고 셀을 원하는 OD까지 자랍니다.

S. cerevisiae를 성장하는 방법을 배운 후 다음 중요한 교훈은 미래의 사용을 위해 저장하는 방법입니다. 플레이트에서 자란 효모는 최대 3개월까지 4°C로 보관할 수 있다. 그러나, 신선한 문화를 성장 하려는 경우, 먼저 접종 하기 전에 신선한 접시에 세포를 다시 줄 무늬 있는지 확인.

오랜 기간 동안 효모 균주의 주식을 저장하려면 글리세롤을 함유 한 극저온에서 세포를 알리쿼트하십시오. 그런 다음 세포는 -80 °C에서 저장될 수 있으며, 여기서 최대 몇 년 동안 보관할 수 있습니다.

이제 효모 세포가 자라는 데 있어 프로가 되었으므로 과학 연구에서 이러한 필수 기술을 어떻게 적용할 수 있는지 살펴보겠습니다. 고정 된 단계에서 세포는 노화 하는 동안 게놈 DNA 불안정을 조절 하는 유전자를 공부 하기 위해 사용할 수 있습니다. 이 비디오 클립은 3일 된 배양에서 셀 의 컬렉션을 보여줍니다. 그들은 정상적인 효모 세포가 증가하는 것을 방지하는 선택적 매체에 도금됩니다. 돌연변이를 획득한 세포만이 이 판에 식민지를 형성할 수 있습니다. 플레이트의 식민지 수는 배양에서 유전체 불안정수준에 비례한다.

노화를 연구하는 또 다른 예는 효모 세포의 연대순 수명을 분석하는 것입니다. 연대순 노화는 기간 동안 세포 생존력의 손실을 나타내며, 여기에 표시된 바와 같이 액체 배양을 성장시킴으로써 연구될 수 있다. 이 비디오에서 과학자는 성장 곡선을 생성하기 위해 다양한 배양을 사양에 로드하여 세포 생존 가능성을 결정하는 데 도움이됩니다.

로그 단계에서 야생 형 효모 세포는 건강하고 정상 세포를 나타내며 리보솜과 같은 진핵 세포기관을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 비디오에서는 로그 단계에서 수집된 셀에서 자당 그라데이션까지 셀 리세이트의 로딩을 볼 수 있습니다. 다음으로, 세포는 퇴적리산물로 분사되고 흡광도 모니터가 리보솜 프로파일을 생성하는 데 사용된다.

당신은 방금 조브가 사카로미세스 세레비시아의 축산 및 유지 보수에 대한 소개를 보았습니다. 이 비디오에서 우리는 효모 성장 곡선을 검토하고 세포 배양을 성장하는 방법을 시연했으며 효모 균주를 유지하는 방법을 보여 주있었습니다. 시청해 주셔서 감사합니다, 그리고 싹이 비디오를 추천하는 것을 잊지 마세요.